PDZ结合激酶（PBK）在肺腺癌和妇科肿瘤中的表达及其临床意义

【摘要】目的：探讨PDZ结合激酶（PBK）在肺腺癌和妇科肿瘤患者中的表达差异及其临床意义，为其作为潜在诊断标志物和治疗靶点提供依据。方法：选取2023年1月至2024年5月在南通大学附属医院及如皋市人民医院确诊的肺腺癌患者15例、妇科肿瘤患者15例，健康对照者15例。通过实时荧光定量PCR检测PBKmRNA的表达水平，并采用免疫组化（IHC）分析PBK蛋白表达情况。对比三组间PBK的表达差异，探讨PBK表达与肿瘤分期、淋巴结转移等临床病理特征的相关性。结果：PBK在肺腺癌组和妇科肿瘤组中的表达显著高于健康对照组（P＜0.05）。肺腺癌组PBK表达水平高于妇科肿瘤组，高PBK表达患者的肿瘤分期（III/IV期比例）和淋巴结转移率显著高于低PBK表达患者（P＜0.05）。结论：PBK在肺腺癌和妇科肿瘤中异常高表达，与肿瘤的分期、淋巴结转移及患者预后密切相关，可以作为潜在的诊断标志物和治疗靶点，为相关肿瘤的精准治疗提供新思路。

【关键词】肺腺癌；妇科肿瘤；PDZ；激酶；临床意义

肺腺癌属于常见肺癌，发病率和死亡率居高不下，属于危害相对较大的恶性肿瘤，
宫颈癌、卵巢癌等妇科肿瘤属于女性常见的恶性肿瘤，这一些肿瘤的发生会对患者的生活质量和生存率带来极大挑战[1]。虽然近年来分子靶向治疗和免疫治疗在癌症领域取得了一定进展，但肿瘤的复杂性和异质性使得传统治疗方法效果有限，迫切需要寻找新的分子标志物，为癌症的诊断、治疗和预后提供更多依据[2-3]。PDZ结合激酶（PBK）是一种非典型丝/苏氨酸蛋白激酶，因为PBK会参与细胞周期调控、增殖和凋亡等多种生物学过程，所以在多种恶性肿瘤中PBK的高表达与肿瘤的发生、发展有一定关联性。例如，有研究认为PBK通过激活PI3K/Akt通路，促进肿瘤细胞增殖和侵袭能力且与患者的不良预后密切相关[4]。对此，本研究旨在探讨PBK在肺腺癌和妇科肿瘤中的表达差异，分析其与临床病理特征的相关性，希望能够为PBK在肿瘤中的诊断和治疗潜力提供科学依据。具体研究如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

选取2023年1月至2024年5月在南通大学附属医院及如皋市人民医院确诊的肺腺癌患者15例、妇科肿瘤患者15例，健康对照者15例。肺腺癌组男性9例，女性6例，年龄45~68岁，平均年龄（56.82±6.21）岁。肿瘤分期I期4例，II期5例，III期3例，IV期3例。淋巴结转移阳性8例，无淋巴结转移7例。吸烟史患者10例，无吸烟史患者5例。妇科肿瘤组均为女性，包括宫颈癌患者9例，卵巢癌患者6例。年龄36~65岁，平均年龄（50.33±7.41）岁。肿瘤分期I期6例，II期5例，III期3例，IV期1例。淋巴结转移阳性7例，无淋巴结转移8例。绝经期后患者10例，绝经前患者5例。健康对照组男性8例，女性7例，年龄40~65岁，平均年龄（53.22±7.43）岁。健康对照者均无恶性肿瘤史及其他严重慢性病史。三组研究对象在性别和年龄分布上差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2方法

肿瘤组织样本：肺腺癌患者和妇科肿瘤患者术后切除的肿瘤组织，经病理科确诊后保存于液氮中待测。

健康对照组样本：从健康对照者中获取外周血单个核细胞，经细胞裂解后提取总RNA。

采用实时荧光定量PCR技术检测PBKmRNA的表达水平，具体步骤如下：采用Trizol试剂从组织样本和外周血中提取总RNA，测定RNA浓度及纯度。使用反转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA。选用SYBRGreen染料法，使用PBK特异性引物（上游引物：5'-XXX-3'，下游引物：5'-XXX-3'），以GAPDH为内参基因。反应条件为95℃预变性5分钟，95℃变性10秒，60℃退火30秒，共40个循环。采用2^−ΔΔCt方法计算PBK相对表达水平。

采用免疫组化方法检测PBK蛋白在组织样本中的表达水平，具体步骤如下：将肿瘤组织和健康对照者血清固定后石蜡包埋，切片厚度约4µm。切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水后在柠檬酸缓冲液中高温修复抗原。用3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，滴加5%羊血清封闭非特异性结合位点。滴加PBK一抗（稀释比例1:200），4℃孵育过夜。滴加生物素化二抗，37℃孵育30分钟，随后加入辣根过氧化物酶标记链霉亲和素。采用DAB显色，苏木精复染用封片剂封片。显微镜下观察切片，PBK阳性表达呈现细胞胞浆或胞核棕黄色染色，按染色强度和阳性细胞比例评分。

1.3观察指标

对比三组间PBK的表达差异，探讨PBK表达与肿瘤分期、淋巴结转移等临床病理特征的相关性。

1.4统计学处理

使用SPSS26.0统计软件分析。计量资料以均数±标准差（x̄±s）表示，三组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）；计数资料比较采用χ²检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1PBKmRNA表达水平

PBKmRNA在肺腺癌组和妇科肿瘤组的表达水平显著高于健康对照组（P＜0.05）。具体数据见表1。

表1PBKmRNA表达水平

2.2PBK蛋白表达水平

免疫组化检测显示，PBK蛋白在肺腺癌组和妇科肿瘤组中阳性表达率显著高于健康对照组（P＜0.05）。肺腺癌组PBK蛋白染色强度明显高于妇科肿瘤组和健康对照组。具体数据见表2。

表2PBK蛋白阳性表达率比较

2.3PBK表达与临床病理特征的关系

PBK高表达与肿瘤分期和淋巴结转移呈正相关。具体数据见表3。

表3PBK表达与临床病理特征的关系

3.结论

PDZ结合PBK属于一种非典型丝、苏氨酸激酶，PDZ结构域是一种蛋白质-蛋白质相互作用的功能域，所以会参与到信号分子传递和细胞骨架重塑，在维持细胞稳态和调控关键生物学过程如细胞周期、增殖及凋亡中发挥重要作用[5]。PBK通过PDZ结构域与下游信号分子结合，能够激活多种肿瘤相关信号通路，以此促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移能力。在肺腺癌和妇科肿瘤中PBK可以通过介导肿瘤微环境重塑、上调增殖相关基因表达以及抑制凋亡相关蛋白的功能，提升肿瘤细胞的侵袭性，所以PBK不仅属于肿瘤分子机制研究的热点，同时也是肿瘤疾病的重要诊断标志物以及治疗靶点。

本研究通过实时荧光定量PCR检测PBKmRNA的表达水平，发现其在肺腺癌组和妇科肿瘤组中显著高于健康对照组（P＜0.05），肺腺癌组PBKmRNA表达最高，这一结果证明PBK在肺腺癌和妇科肿瘤的发生发展中可能具有重要作用。此外，免疫组化检测显示，PBK蛋白的阳性表达率在肺腺癌组和妇科肿瘤组中均显著高于健康对照组（P＜0.05），肺腺癌组的染色强度显著高于妇科肿瘤组，证明PBK在不同类型肿瘤中可能存在表达水平和作用机制的差异。

PBK高表达与肿瘤分期和淋巴结转移呈正相关，证明PBK不仅会参与肿瘤的生长过程，同时在肿瘤的侵袭和转移中发挥重要作用。PBK通过激活PI3K/Akt信号通路促进细胞周期进展，能够基于抑制凋亡相关因子的活性，提升肿瘤细胞存活能力。

综上，PBK在肺腺癌和妇科肿瘤中异常高表达与肿瘤晚期分期和淋巴结转移相关，PBK作为重要分子标志物和治疗靶点的潜力能够为相关肿瘤的精准诊断和个体化治疗提供理论依据，值得推广。

【参考文献】

[1]宋开蓉，刘媛，陈思璐，等.PDZ结合激酶/T-LAK细胞来源的蛋白激酶在恶性肿瘤中的作用机制研究进展[J].癌症进展，2021，19(5):448-453.

[2]武锐锋，刘宇宏.PDZ结合激酶/T淋巴细胞因子激活的杀伤细胞源性蛋白激酶的作用机制及其在肿瘤治疗中的潜在价值[J].临床荟萃，2023，38(8):763-768.

[3]李慧艳，潘欣，靳宝峰，等.肿瘤转移相关基因syntenin的融合表达及纯化[J].生物技术通讯，2004，15(4):323-325.

[4]曾长青，黄良祥，郑羽，等.PDZ结合域转录共激活因子在结肠癌组织中的表达及其临床意义[J].中华胃肠外科杂志，2015，18(11):1154-1157.

[5]修子涵，唐旭东.YAP/TAZ在肿瘤细胞上皮-间充质转化中作用的研究进展[J].医学综述，2018，24(14):2787-2791，2796.

项目来源：南通市科技局

项目编号：MSZ2023060

项目名称：PBK 介导 PGK1核易位诱导自噬促进肺腺癌细胞免疫逃逸的机制研究