血清标本艾滋病毒抗体检测结果的分析

【摘要】目的：对血清标本艾滋病毒抗体检测结果进行分析，了解患者感染情况、感染途径以及分布情况。方法：选择2017.01-2022.01我中心筛查的来自高危行为人群的8140例筛查对象，以酶联免疫法为检测方法，对血清进行初步筛查，对于初筛结果呈现阳性的患者，使用胶体硒检测再次进行复核。结果：8140例检测者中，经过初筛以及复核，结果显示：有87例患者检测结果为阳性，占比为1.07%。结论：对于具有高危行为的人群，接受常规艾滋病毒抗体检测可尽早发现艾滋病感染者，是防止艾滋病病毒进一步传播的有效途径。

【关键词】血清；艾滋病；病毒；检测；酶联免疫法

艾滋病又称为获得性免疫缺陷综合症，是一种传染性疾病，主要由人类免疫缺陷病毒（HIV）导致。据研究，HIV是从一种猴病毒(SIV)转化而来的，而SIV则源于非洲的格林尼治长尾猴及其近缘物种[1-2]。HIV在20世纪70年代初出现于非洲，主要是因为当时非洲的许多国家正处于战乱和贫困之中，使得人们的生活方式和卫生水平极为恶劣，同时一系列途径又加速了HIV的传播。随后疫情开始向全球扩散，目前已在全球范围内导致约3800万人感染[3-4]。此病毒的传播主要涉及三大途径，即性接触、母婴传播以及血液传播。人体免疫系统是维持健康的关键，它的主要功能是识别和对抗外部入侵的病原体。而HIV在人体内的主要攻击目标是CD4+T淋巴细胞，这种细胞在免疫系统中占据中心位置，因为它们负责调节其他免疫细胞的活性来有效抵御病毒和细菌的侵害[5-6]。但是，由于HIV持续侵害这些细胞，导致CD4+T淋巴细胞的数量随着时间的推移而不断减少。这样，人体的免疫功能就会遭到严重破坏。当免疫系统功能下降到一定程度时，人体将变得异常脆弱，容易受到各种外部病原体的侵袭。更为严重的是艾滋病病毒感染者在症状显现出来前，外观与正常人群并无明显区别，因此，加大了艾滋病病毒进一步传播的风险，若想有效抵御该疾病，尽早进行检测和诊断具有重要意义[7-9]。目前临床上对于该种病毒的检测主要依赖于两种检测方法，即免疫荧光检测、酶联免疫吸附试验。且该病毒检测主要分成三个步骤，即初步筛查、复核实验以及结果确认。本中心现将8140例自愿咨询检测者的血清标本检测结果报道如下：

1资料与方法

1.1一般资料

入选本研究的对象主要来自2017.01-2022.01我中心进行检测的高危人群对象共8140例，这类高危人群既往史包括吸毒史、前往AIDS高发区史、艾滋病病毒感染区住院史、高危性生活史、进行牙科检查或内镜检查史、输血史等，其中男性患者有5918例，女性2222例，年龄范围1-86岁，年龄均值为43.67岁，标准差为9.97岁。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂

本实验主要使用酶标分析仪（Bio-Rad Model 3550）、微孔板洗板机（Bio-Rad Model 3358）、分光光度计（Shimadzu UV-1800）等设备。所用的试剂包括酶联免疫吸附试验试剂盒（包括包被抗原、酶标抗体等）、胶体硒检测试剂盒（包括硒稀释液、硒结合物等）、磷酸盐缓冲液（PBS）、洗涤液、底物等。以上仪器与试剂均通过国家药监局注册批准，且未有检验不合格以及超过有效期的产品。

1.2.2方法

本研究采用两种互补的方法进行检测，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和胶体硒快速检测法（CGD）来进行艾滋病毒抗体的初筛和复核检测。（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）：①样本处理：血清标本采集：从研究对象中采集血清标本，使用一次性采血针和试管进行采集，确保标本的新鲜和无污染。将采集的血清标本应立即标注并储存在低温条件下，避免反复冻融，确保样本质量。②制备试剂：HRP（辣根过氧化物酶）抗体标记的过程如下：首先，将5μgHRP溶解于0.5mL蒸馏水中，然后添加0.5mL的0.06 mol/L 过碘酸钠水溶液，混合均匀，在4℃条件下静置30分钟。随后，取出混合液，加入0.5 mL的0.16 mol/L 乙二醇水溶液，室温下静置30分钟。接下来，将1 mL 含有5 g 纯化抗体的水溶液加入，混合均匀，然后装入透析袋中。使用0.05 mol/L、pH9.5 的碳酸盐缓冲液，在4℃条件下缓慢搅拌透析6 小时，以促使反应结合。最后，将上述混合物加入等体积的饱和硫酸铵溶液，在4 ℃条件下静置30分钟，然后将所得沉淀物溶解于少量0.02 mol/L、pH7.4的PBS中，并进行透析过夜（4 ℃）。次日，离心去除不溶物，即可制得酶标抗体。③样本处理：首先，取出血清标本并进行离心，将上清液用于后续的检测，为确保检测结果位于试剂盒的线性范围内，需要对样本进行适度稀释。将经过稀释的血清标本加入反应板的小孔中，此时，样本中的HIV抗体将与反应板中的抗原结合，形成复合物。随后使用洗涤缓冲液洗净反应板，以去除未结合的物质，并加入已标记HRP的抗体，与已结合的HIV抗体形成夹心复合物，再次用洗涤缓冲液洗净反应板，加入底物，使其与HRP发生反应，产生可测量的信号。最后，加入终止液停止底物的反应，生成终点颜色，使用酶标仪测量吸光度，结果与标准曲线相匹配。（2）胶体硒快速检测法：血清标本采集和储存与ELISA方法相同。将50μL血清标本加入样品反应垫中。等待15-60 min，等待样本充分与硒胶体-抗原复合物发生反应。后通过读取检测装置上出现的红线来判断样本中是否含有HIV1/2抗体。如果样本中含有HIV抗体，将会出现红线。如果样本中无HIV抗体，硒胶体-抗原复合物将不会与反应板上的合成肽和重组抗原结合，则不会出现红线。

1.3判断标准

为了准确判断血清标本中的艾滋病毒抗体检测结果，本研究采用严格的标准进行评定，依据中国疾病预防控制中心《全国艾滋病检测技术规范》的标准进行判定：（1）HIV抗体阳性： 血清样本中至少出现2条env带（gp41和gp160/gp120），或者至少1条env带和p24带同时出现，即可判定为HIV抗体阳性。（2）HIV-2抗体阳性：对于HIV-2抗体的检测，同样采用严格的标准。血清样本中至少出现2条env带（gp36和gp140/gp105），并符合试剂盒提供的阳性判断标准，即可判定为HIV-2抗体阳性。（3）HIV抗体阴性：当被检测血清样本中没有出现HIV抗体特异带时，可以判定为HIV抗体阴性，表示未检测到艾滋病毒抗体存在。（4）IV抗体不确定：在某些情况下，被检测血清样本可能出现HIV抗体特异带，但不足以明确判定为阳性。在这种情况下，可将其判定为HIV抗体不确定，需要进一步检测和复核以确定最终结果。

2.结果

2.1检测结果

根据检测结果显示，8140例检测对象中有87例患者最终检测结果为阳性，占比为1.07%。被确诊为阳性的患者中，有39例患者出现9条带，有28例患者出现5-8条带，有20例患者出现1-2条带，占比分别为44.83%、32.18%、22.99%。此外，87例患者中男女之比为49∶38，占比分别为56.32%、43.68%。

2.2年龄分布情况

被确诊为阳性的87例患者中，年龄范围处于20-40岁之间的有49例，占比为56.32%。年龄范围＜10岁的有5例，占比为5.75%，年龄范围10-19岁之间的有9例，占比为10.34%。40岁-60岁的有18例，占比为20.69%，60岁以上的有6例，占比为6.90%。

2.3感染途径分布

被确诊为阳性的87例患者中，性接触感染（同性、夫妻）有39例，占比为44.82%。母婴垂直感染有2例，占比为2.30%，输血史感染有13例，占比为14.94%，共有针头吸毒史有28例，占比为32.18%，其余患者感染途径均不明。此外，上述感染中，有6对为夫妻共同感染，占比可达6.90%。

2.4职业分布

被确诊为阳性的87例患者中，干部7例，占比为8.05%，学生24例，占比为27.59%，个体、自由职业者以及无业游民46例，占比为52.87%，农民10例，占比为11.49%。

3讨论

自从1981年艾滋病首次被发现以来，它已成为全球重大的公共卫生问题。尽管我们已经取得了在防止疾病传播和延长患者生命方面的显著进步，但艾滋病仍然不能被彻底治愈[10-11]。HIV是一种逆转录病毒，其基因组由RNA构成，其能够将自己的RNA基因组复制成DNA并插入到宿主细胞的基因组中。一旦HIV进入人体，就会侵入免疫系统的CD4 T细胞，并将自己的基因组整合到这些细胞的DNA中[12-13]。这意味着，即使使用抗病毒药物抑制HIV病毒的复制，这些已被HIV感染的T细胞仍会携带病毒基因，形成所谓的“病毒潜伏库”。此外，HIV还具有高度的突变率，这是因为其在复制自己的RNA基因组时，逆转录酶的错误率极高，使得每次复制都可能产生新的突变[14-15]。这导致病毒在短时间内就能产生大量的变异体，从而使得药物很难彻底清除体内的所有病毒。但HIV感染并不会直接导致死亡，它会严重削弱免疫系统，使身体无法抵御其他疾病，从而增加患者死亡风险。

据联合国艾滋病规划署(UNAIDS)数据，自艾滋疾病爆发起，近7930万人曾感染，其中3630万不幸去世。至2021年6月30日，全球HIV病毒感染人数为3770万，但只有约84%的受感染者清楚他们的健康状况。因此，早期发现和干预HIV感染是控制疾病传播的重要策略。在HIV感染早期阶段，患者的免疫系统通常尚未受到严重破坏，因此临床症状不明显[16]。在本次研究中，包含16例HIV抗体阳性患者，这类患者在就诊过程中未出现AIDS症状。该类患者分别来自不同的临床科室，这一结果表明不同科室均应对特定高危人群进行HIV筛查，特别是对于部分有可疑AIDS症状、性病史、吸毒史、性行为史、曾在高感染风险地区接受手术和输血的患者。在这些高危人群中，应详细询问其病史，并将其列为重点筛查对象。此外，对于疑似艾滋病病毒感染的患者，即使初次HIV抗体检测结果为阴性，也应考虑到患者可能处于感染窗口期，因此，相关工作人员应与患者进行沟通，建议其待窗口期结束后再次进行复检。总之，血清HIV抗体检测在预防医源性HIV传播中具有不可忽视的地位。只有通过及时发现HIV感染者，方可采取措施降低病毒传播风险，保护患者和医护人员生命健康。

酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种广泛用于HIV抗体检测的方法。其基本原理是检测样本中的抗原或抗体，将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原与抗体能够在固相载体表面上发生特定的化学反应。随后，通过洗涤步骤将液相中的未结合成分去除，最终通过酶作用于底物后的显色反应来判断检测结果。这项技术具有高敏感性和高特异性的特点，能够准确地检测HIV抗体，从而有效降低假阳性结果的风险[17]。

综上所述，HIV抗体检测在早期HIV感染中具有重要作用，希望未来研究和实验能够进一步完善HIV抗体检测方法，以提高检测的敏感性和准确性，从而更好地服务于临床实践和公共卫生。

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