毛枝柞木水提液对高尿酸血症大鼠降尿酸及肾保护作用的研究

摘要  目的：研究毛枝柞木水提液对“酵母膏+乙胺丁醇”诱导的高尿酸血症模型大鼠是否有降  尿酸和肾脏保护作用 。方法：准备 Wistar 大鼠 60 只 ，随机分成 6 组 ，每组 10 只 ，分别为  空白对照组、模型组、毛枝柞木水提液高 、中、低剂量组，以及别嘌呤醇组 。除空白对照组， 其他组均用“酵母膏+乙胺丁醇”灌胃来构造高尿酸血症大鼠模型 。造模成功后 ，别嘌呤醇组  予别嘌呤醇 75mg/（kg·d）灌胃，毛枝柞木水提液高、中、低剂量组分别给予 6.4g/（kg·d）、 3.2g/（ kg·d） 、1 .6g/（ kg·d） 毛枝柞木水提液灌胃 3 周 。末次给药前一天， 收集 24h 尿  量； 末次给药后取血 ，检测血清中肌酐（ CREA） 、尿素（ UREA） 、尿酸（ UA） 水平； 取  肾组织 ，HE 染色观察病理形态的变化 。结果： 同空白组相比 ，模型组大鼠尿素 、尿酸显著  升高（ p＜ 0.01） ，肌酐升高（ p＜ 0.05） ，尿量减少； 模型组大鼠肾小球肿胀， 肾小管上  皮边界模糊，细胞肿胀 、变性 ，肾间质有不同程度炎性细胞浸润，存在肾组织损伤 。同模型  组相比，毛枝柞木中剂量组 、毛枝柞木高剂量组 、和别嘌呤醇组尿酸显著降低（p＜0.01） 。 毛枝柞木高剂量组 、中剂量组大鼠肾组织损伤减轻 。结论:  毛枝柞木水提液中剂量、高剂量  能明显降低高尿酸血症模型大鼠的血尿酸水平， 而且对肾组织损伤有保护作用。

关键词 :  毛枝柞木； 高尿酸血症； 大鼠； 肾功能； 中药； 

objective: To investigate the protective effect of water extract of Tussah wood on hyperuricemia  and  renal function  in  rats.  Methods: 60 Wister  rats were  randomly divided into blank control group, model group, high, medium and low dose groups and allopurinol group with 10 rats in each group. Except the blank control group, the other groups were given "yeast paste + ethambutol" to establish hyperuricemia rat model. After  mold  making,  allopurinol  group  was   given  75mg/  (kg  · d)  allopurinol   by intragastric administration, while the high, medium and low dose groups were given 6.4g/  (kg · d),  3.2g/  (kg · d)  and  1 .6g/  (kg · d) water  extract  of  Trichoplia  tussah, respectively, by intragastric administration for 3 weeks. Urine volume was collected 24 hours before the last administration. Serum creatinine (CREA), UREA (UREA) and uric acid (UA) levels were detected after the last dose. The pathological morphological changes of renal tissue were observed by HE staining. Results: Compared with blank group, urea  and  uric  acid  in  model  group were significantly  increased  (p  < 0.01),

creatinine was increased (p < 0.05) and urine volume was decreased. In the model group, the  glomerulus was  swollen, the  boundary  of  renal  tubule  epithelium was unclear, the cells were swollen and denaturated, and inflammatory cells infiltrated the renal interstitium, and there was kidney injury. Compared with model group, the uric acid in middle dose group, high dose group and allopurinol group was significantly decreased (p < 0.01). The damage of kidney tissue was alleviated in high-dose and medium-dose groups. Conclusion: The water extract of Tussah can effectively reduce the level of uric acid in hyperuricemia rats, and has a certain protective effect on kidney.

keywords: Tussah; Hyperuricemia; Rat; Kidney function; Chinese medicine;

高尿酸血症是由嘌呤代谢紊乱和尿酸生成增多/排泄减少 ，所引起的一种细胞外液尿酸  盐超饱和状态，其可能是由饮食生活中摄入过量的高糖 、高嘌呤、酒精，或骨髓增生性疾病  等一些获得性因素而导致的 UA 过量引起 。HUA 患者可通过促进 ROS 产生诱发 AS  病变的发展[4]， 还可通过引发氧化应激 、肾纤维化和炎症等机制导致肾损伤[5]。

目前用于治疗高尿酸血症的药物如非布司他、苯溴马隆、别嘌醇等，在临床上普遍应用  并取得了一定的疗效，但它们的副作用也不容忽视，包括增加心因性和全因死亡风险，引起  肝损伤[11]，诱发严重超敏反应综合征[12]等。而中药治疗高尿酸血症具有靶点较多、价格经济、 服用安全等优势，相信通过更深入的研究，未来一定会有可观的临床应用和发展前景[13]。本研究拟建  立 HUA 大鼠模型， 以血清尿酸 、肌酐 、尿素氮值和 HE 染色观察肾组织为主要指标， 分析  毛枝柞木水提液对“酵母膏+乙胺丁醇”构建的高尿酸血症模型大鼠的降尿酸及肾脏保护作用， 以期为进一步开发抗 HUA 药物提供参考。

1  材料与方法

1 .1 动物准备  清洁级 Wistar 雄性大鼠 60 只,重约 250-300g， 鼠龄 3 个月 ，饲养环境；温度约 20-25℃ ,  湿度约 50%-60% ，光照-黑暗周期 12h ，实验大鼠先适应性喂养7d ，健康 状态良好。

1 .2 主要试剂和仪器  肌酐（CREA)试剂盒（70127，山东博科生物）；尿酸（ UA)试剂盒（70125，山东博科生物）；尿素（ UREA）试剂盒（70124，山东博科生物）。

1 .3 药物准备  酵母膏 、乙胺丁醇 、别嘌呤醇， 毛枝柞木水提液： 称取自采去皮的毛枝柞木  草本 100g ，放入烧杯 ，加去离子水 ，没过药物 ，浸泡 5h， 先大火 ，再文火 ，共煎熬 2 次， 每次均煎 1 .5h； 取熬好后的毛枝柞木水提液 300ml， 置入烧杯备用， 先离心筛出药渣 ，然  后去除液体中游离的粗粒子（加水提液体积 20%的壳聚糖凝絮剂），再予磁力搅拌 0.5h 后  放置一晚； 二次离心 ，再次筛出药渣后 ，取用最上层清液用微孔滤膜（ 0.45μm） 滤过 ，滤  液冷藏于冰箱中 ，制备完成的药液 ，1ml 相当于 0.3ml 生药。

1 .4分组与造模准备  准备 Wistar 大鼠 60 只，根据随机数字表法随机分为 6 组，每组 10 只， 分别为空白对照组 、模型组 、毛枝柞木水提液高 、中 、低剂量组 ，以及别嘌呤醇组 。除空白  对照组 ，余组别均给予“酵母膏（ 15g/kg·d） +乙胺丁醇（ 0.125g/kg·d）”混悬灌胃， 用于  构建高尿酸血症大鼠模型 。构建完成后 ，别嘌呤醇组大鼠予（ 75mg/kg·d）别嘌呤醇灌胃， 毛枝柞木高 、中 、低剂量组分别给予（ 6.4g/kg·d） 、（3.2g/kg·d） 、（1 .6g/kg·d）毛枝  柞木水提液灌胃 3 周。

1 .5标本收集  第 20 天(末次给药前 1 天)置大鼠于代谢笼收集 24h 尿液， 计 24h 尿量； 第  21 天（末次给药当天 1h 后）处死大鼠，从大鼠髂血管取血，静置 30min 后，2000-2500r/min  离心 15 min ，血清分装后保存待检；剖开大鼠腹腔 ，摘取新鲜肾组织 ，常规制备石蜡切片。

1 . 6 指标检测

收集大鼠 24h 尿量；全自动生化分析仪测定血清中肌酐 、尿酸 、尿素氮水平；HE 染色观察 肾脏病理组织形态。

1 .7数据分析处理  统计各组大鼠肌酐 、尿酸 、尿素氮值 ，采用 SPSS 26.0  软件进行统计学 分析，检测水平以 x±s 表示，所有数据均符合正态性检验，组间比较采用单因素方差分析和 韦尔奇检验(P＜0.05 为差异有统计学意义） 。

2 结果

2.1 毛枝柞木水提液对高尿酸血症大鼠血清肌酐 、尿素 、尿酸 、尿量的影响

与空白组对照组相比，模型组大鼠血清尿素 、尿酸显著升高（p＜0.01） ，肌酐升高（p ＜0.05） ，尿量有所减少；

与模型组相比 ，毛枝柞木高剂量组 、毛枝柞木中剂量组肌酐降低（ p＜0.05） ；毛枝柞  木高剂量组尿素降低（ p＜0.05） ；毛枝柞木中剂量组 、毛枝柞木高剂量组 、和别嘌呤醇组  尿酸显著降低（ p＜0.01） ，毛枝柞木低剂量组尿酸也有所降低（ p＜0.05） ，毛枝柞木高、 中 、低剂量组和别嘌呤醇组尿量均无明显差异。

表 1 毛枝柞木水提液对每组大鼠肌酐  、尿素 、尿酸的影响

注：与空白对照组比较 ，＃P＜0.05 ，＃ ＃P小于 0.01 ；与模型组比较 ，*P＜0.05 ，**P＜0.01

2.2  各组大鼠肾组织病理形态变化

同空白对照组（ 图A）对比，空白对照组大鼠肾小球 、肾小管结构正常，边界清晰 。 模 型组（ 图 B）大鼠肾小球肿胀 ，肾小管上皮边界不清 ，细胞肿胀 、变性 ，肾间质可见炎性细 胞浸润。

3  讨论

研究表明，高尿酸血症 不仅能够诱发肾脏小动脉病变，造成肾损伤，引起肾内血流动力学的改变，是心血管疾病的 独立危险因素[24]，而且对慢性肾脏病发生、发展具有非常重要的影响，其机制可能与尿酸盐 晶体沉积 、肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活 、氧化应激 、炎性反应等密切相关[25] 。因此， 在降尿酸的同时， 降低肾功能的损伤也同样重要。

本研究利用酵母膏和乙胺丁醇构建 HUA 大鼠模型， 分析毛枝柞木水提液对 HUA 大鼠 的影响，在这些高尿酸血症大鼠模型中，毛枝柞木水提液中剂量的应用显示出了明显的降尿 酸趋势 。结果显示， 毛枝柞木不仅能够降低 HUA 大鼠的血清 UA 水平 ，促进肾脏 UA 的排 泄 ，也能对 HUA 模型大鼠肾组织发生的病理变化 ，发挥改善肾组织损伤 ，保护肾功能的作 用。具体来说，毛枝柞木水提液能够明显降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平，从而减轻其

肾脏的病变。这一结果不仅验证了前期课题组的预测，也可能进一步丰富毛枝柞木在传统医 学中的应用价值 ，也为高尿酸血症的临床治疗提供了新的思路。

参考文献

[1] 冯文文, 崔岱, 杨涛. 《中国高尿酸血症与痛风诊疗指南(2019)》 要点解读[J].  临床内科杂 志, 2020,37(07):528-531 .

[2] Yanai   H,   Adachi   H,   Hakoshima    M,   et   al.   Molecular    Biological   and   Clinical Understanding of the  Pathophysiology and    Treatments  of  Hyperuricemia  and  Its Association with Metabolic Syndrome,   Cardiovascular Diseases and Chronic Kidney Disease[J]. Int J Mol Sci, 2021 ,22(17).

[3] 赖晓英.  中国南方某地体检人群高尿酸血症检出情况及其与慢性肾病的相关性研究[D].  南 方医科大学, 2021 .

[4] Kimura  Y, Tsukui  D,  Kono  H.  Uric  Acid  in  Inflammation  and  the  Pathogenesis  of Atherosclerosis[J]. Int J Mol Sci, 2021 ,22(22).

[5] Su   H  Y,  Yang   C,   Liang   D,  et  al.  Research  Advances  in  the   Mechanisms  of Hyperuricemia-Induced Renal Injury[J]. Biomed Res Int, 2020,2020:5817348.

[6] 陈蕾,  伍成凯,  康峻鸣,  等.  我国 45 岁及以上中老年人群高尿酸血症与常见慢性病的关联 研究[J].  中国全科医学, 2021 ,24(04):447-452.

[7] 于雪莹,  张铁,  曹沁梅,  等.  中国中老年普通人群血清尿酸水平与血脂谱的关系[J].  中国老 年学杂志, 2019,39(15):3634-3638.