布鲁氏菌病患者实验室检测诊断方法研究

【摘要】目的：研究布鲁氏菌病患者实验室检测方法在疾病诊断中的应用。方法：将我院2023年1月-2023年12月收治的168例布病患者分为对照组和观察组，各84例。对照组采用布鲁氏菌抗体虎红平板凝集法(BPAT)检测，观察组采用试管凝集法(SAT)检测，对比分析两组的诊断准确率。结果：检测结果显示，两组检测阳性率无统计学意义（P＞0.05）；对照组敏感度显著高于观察组（P＜0.05）；观察组特异度显著高于对照组（P＜0.05）。结论：与培养方法比较, 布鲁氏菌抗体虎红平板凝集法(BPAT)、试管凝集法(SAT)试验快速、无危害、更敏感,在常规的临床实验室更容易操作，提高疾病的诊断，具有广大的社会效益。

【关键词】布鲁氏菌病；抗体虎红平板凝集法(BPAT)；试管凝集法(SAT)；诊断

近年来,布鲁氏菌病疫情在世界范围内呈反弹超势,我国尤甚.进入2000年以后,人间布病在我国成为报告发病数上升速度最快的传染病之一，令我国布病防治形势十分严峻. 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的世界性严重的人畜共患疾病,其主要临床表现为流产、不孕不育、发热、全身肌肉和多发性、游走性大关节疼痛及肝脾肿大等[1]。细菌学诊断和血清学诊断方法是布鲁氏菌病的主要诊断方法,其中细菌学诊断耗时较长、环境要求高、检出阳性率低、敏感性不强。BPAT法检测成本低、敏感性强、操作简单；SAT法特异性、准确性均较好,可用于布鲁氏菌病的早期诊断。

1资料与方法

1.1一般资料 将我院2023年1月-2023年12月收治的168例布病患者分为对照组和观察组，各84例。纳入标准：①因腰疼、发热、膝疼而就诊，具有流行病学接触史（与牛羊有所接触），怀疑为布鲁氏杆菌病；②年龄≥18 岁；③神志始终保持清醒。排除标准：①合并血液系统疾病；②合并其他传染病；③存在认知或精神障碍。布病诊断标准参照国家卫生健康委员会《布鲁氏菌病诊断标准》（WS269-2019）[2]。三组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2方法 金标准[3]：血清学检测(SAT、补体结合实验、抗人免疫球蛋白实验)、布鲁氏菌分离培养(体液、骨髓等)至少 1 项为阳性，有布鲁氏菌接触史和发热乏力等相关临床症状者。采集要求：测试人空腹12-14小时采集静脉血标本。标本处理：离心机4000转每分钟，离心5分钟，提取血清备用。检测：在生物安全二级实验室，生物安全柜内进行布鲁氏菌抗体虎红平板凝集法(BPAT)、试管凝集法(SAT)检测。①虎红平板凝集试验：采用蜡笔在载玻片上划分方格，将0.03mL血清样本加入载玻片上方格内，将0.03mL布鲁氏杆菌病虎红平板抗原加入至血清中，充分摇匀，在室温20℃环境中持续观察5min，如发现血清出现凝集反应（液体浑浊，有颗粒物或凝聚片），即可判断为阳性，反之则为阴性。②试管凝集试验：将血清样本分别装入5支小试管，第1支试管中加入2.3mL生理盐水，第2支试管未添加任何物质，第3-5支试管中分别加入0.5mL生理盐水。再在第1支试管中加入0.2mL血清，混匀；从第1支试管中分别取0.5mL加入至第2、3试管中，混匀；再从第3支试管中取0.5mL混合溶液加入至第4支试管中混匀，再从第4支试管中取0.5mL混合溶液加入至第5支试管中混匀，再从第5支试管中取出0.5mL混合溶液丢弃。按照上述规律第2-5支试管中血清稀释比例分别为1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100，再采用生理盐水对抗原进行稀释，稀释比例为1∶10，再将稀释后的抗原加入至第2-5支试管中（第1支作为血清对照不加入抗原），分别加入0.5mL，使第2-5支试管中血清稀释为1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。结果判定：①（-）：无凝集，液体不清亮；②（+）：有微量凝集，液体25%清亮；③（++）：显著凝集，液体50%清亮；④（+++）：几乎完全凝集，上层液75%清亮；⑤（++++）：完全凝集，上层液100%清亮。结果50%清亮度（++）及以上判定为阳性。

1.3统计学方法 应用Excel2017和SPSS20.0软件进行数据整理和分析，计量资料采用中位数（median，MED）和四分位数（interquartile range，IQR）表示，计数资料以频数（%）表示。采用χ2检验（四格表资料）和秩和检验（Wilcoxon两样本比较法）进行数据的统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

检测结果显示，两组检测阳性率无统计学意义（P＞0.05）；对照组敏感度显著高于观察组（P＜0.05）；观察组特异度显著高于对照组（P＜0.05）。见表一。

表一 两组检测结果分析[n（%）]

3讨论

近年来我国布鲁氏菌病的流行出现了新的趋势,即布鲁氏菌病疫区从牧区向半农半牧区、农区及城市蔓延;形式以多发的、分散的点状流行代替了大规模的爆发流行形式:受侵的人群除职业人群外,非职业人群感染率相对上升。老年、青少年以及儿童的发病有增高的趋向。人类对布鲁氏菌普遍易感，布鲁氏菌病患者可以重复感染布鲁氏菌。此病的发生、发展和转归比较复杂，是由布鲁氏菌引起的世界性严重的人畜共患疾病。布氏杆菌侵入人体后可引起以长期发热、关节疼痛、肝脾肿大和慢性化为主要特征的机体变态反应性疾病。由于布病对人群健康、经济发展和国家安全都构成了严重的威胁,因此世界动物卫生组织将其列为B类法定传染病，中华人民共和国传染病防治法将其归为一类传染病。尽管在许多发展中国家是一种地方病,但是布病仍存在漏诊和漏报。随着分子生物学及免疫学技术的不断创新,使得人们对于布病及布鲁氏菌有了进一步的认识,并且在布鲁氏杆菌致病机制、诊断技术、治疗药物和疫苗的研究及流行病学的调查研究等方面进行了一些有意义的尝试和探索。目前,中国部分地区人间布病疫情非常严峻,如疫情进一步扩散,对群众健康、当地经济和社会稳定的不利影响将进一步加大,尽快采取更加有力的措施,控制疫情的发展,做好布病患者的早发现、早诊断和规范化治疗,防止慢性化尤为重要。

对于布鲁氏菌病实验室诊断,要结合实情选择检测方法,伴随目前检测技术的进步和发展, 布鲁氏菌抗体虎红平板凝集法(BPAT)、试管凝集法(SAT)方法检测成本低、敏感性强、操作简单。SAT法特异性、准确性均较好,用于布鲁氏菌病的早期诊断值得应用推广,将对防控、诊治布鲁氏菌病意义重大。

【参考文献】

[1]包桂英，陈俊杰，张天承，等.布鲁氏菌病患者血液中布鲁氏菌与临床症状和抗体水平关联性研究[J]. 疾病监测，2023，38（4）：432-435.

[2]葛晶雪，尹世辉，唐磊，等.2012-2022年黑龙江省人间布鲁氏菌病流行特征分析[J].中国卫生工程学，2023，22（6）：729-732.

[3]李树军，张玉龙，马龙，等.虎红平板凝集试验、标准试管凝集试验、酶联免疫吸附方法

在布鲁氏菌病中检测的特性及诊断效能[J].中国热带医学，2022，22（11）：1078-1081.