p62、MMP-2、Ki-67在骨巨细胞瘤中的表达及其临床意义

[摘 要]：目 的 探讨p62(protein 62)、MMP-2(Matrix metallopeptidase 2)及Ki-67(Proliferation index)在骨巨细胞瘤组织中的表达情况及其临床意义。方 法 选取2020年1月至2023年10月本院收治的30例骨巨细胞瘤患者为GCT组，随机选取相应距肿瘤组织5cm以上的正常骨良性肿瘤30例（对照组）。采用免疫组织化学染色SP法检测p62、MMP-2及Ki-67蛋白在GCT患者中的表达，并且分析这3种蛋白的表达与GCT临床病理参数的关系。结 果 GCT组与对照组比较，p62、MMP-2、Ki-67阳性表达率差异有统计学意义（P<0.05）。结 论 p62、MMP-2和Ki-67在GCT阳性表达，并且 p62、MMP-2分别与Ki-67呈正相关，提示三者肯能与骨巨细胞瘤恶性程度及侵袭力有关，对后续评估患者的病情以及预后具有一定的参考价值。

关键词：p62；MMP-2；Ki-67；骨巨细胞瘤

骨巨细胞瘤(GCTOB)是一种良性但局部侵袭性肿瘤，是一类起源于骨髓间叶组织的原发性骨肿瘤，20～40岁人群中较为常见，属于交界性或具有恶性潜能的骨肿瘤[1]。在骨巨细胞瘤中，蚀骨细胞引发骨松质进行性溶解破坏，钙离子释放入血。骨巨细胞瘤主要分为破骨细胞样的多核巨细胞、梭形基质细胞和单核前体细胞[2]，其中梭形基质细胞具有无限增殖能力，是导致骨巨细胞瘤发生溶骨性骨破坏的关键因素，但是其发病机制并不明确。有研究报道[3]，自噬相关蛋白（p62）在GCT肿瘤组织中呈阳性表达，基质金属蛋白酶2（MMP-2）以及增殖指数（Ki-67）抗原的表达水平与人体某些恶性肿瘤的浸润、转移、复发密切相关。本研究探讨P62、MMP-2及Ki-67蛋白在GCT组织中的表达及三者之间的关系。

1材料与方法

1.1 标本来源

选取2020 年1月至2023年10月徐州市第一人民医院病理科30例骨巨细胞瘤的标本(骨巨细胞瘤组)和30例相应距肿瘤组织5cm以上的癌旁正常肌肉组织及骨良性肿瘤标本（对照组) 。

两名病理学家独立审查了所有病例的HE染色的载玻片，以及临床和影像学检查。所有病例均为手术切除标本。

1.2主要试剂

通用型p62鼠抗人单克隆抗体购自美国Abcam公司；MMP-2及Ki-67图抗人多克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组织化学SP-9000试剂盒、PBS（0.01 mmol/L，pH7.2~7.4）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3实验内容

1.3.1 指标检测

采用免疫组织化学SP法检测组织中p62、MMP-2和Ki-67表达水平，按照操作说明进行抗原热修复处理。骨巨细胞瘤患者肿物切除后均使用10%的组织的中性甲醛固定，依据病理规定规范取材，石蜡包埋，3μm连续切片，常规石蜡脱水，抗原高压修复，室温冷却30min，每张切片均按照免疫组化SP法操作流程制作，DAB显色，镜下观察后自来水冲洗，苏木素复染，磷酸盐缓冲液（PBS）或自来水冲洗返蓝，梯度酒精脱水，二甲苯透明后，中性树胶封固。GCT切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。根据切片阳性细胞阳性着色度和着色面积进行阴性、弱阳性、阳性、强阳性判定，p62、MMP-2和Ki-67水平表达呈阳性、强阳性判为高表达，弱阳性或阴性判为低表达。

1.3.2免疫组织化学评分

依据染色强度、染色阳性细胞范围双评分标准评估蛋白表达，染色强度等级无色、淡黄色、黄色、棕褐色分别评定为0分、1分、2分、3分。免疫组化阳性细胞百分比以≥25%为阳性。反应等级分为：<25%为0分；≥25%且<50%为1分；≥50%且<75%为2分；≥75%为3分。染色强度分为无，弱，中等，强4个等级，没有着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞百分比和着色强度的乘积为最终结果，大于3为阳性，小于等于3为阴性。

1.4统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据处理分析，计量资料组间比较采用独立样本t检验；计数资料采用X2 检验及Pearson相关分析，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1  p62、MMP-2 及 Ki-67 在骨巨细胞瘤中的表达情况

p62阳性定位于细胞质，呈棕黄色，在GCT中的阳性率为46.67%（14/30），癌旁正常骨肿瘤中的阳性率为6.67%（2/30）。MMP-2阳性产物主要位于肿瘤细胞浆内及胞膜，呈棕黄色、棕褐色颗粒，在GCT中的阳性率为40%（12/30），癌旁正常骨肿瘤中的阳性率为10%（3/30）。Ki-67阳性定位于细胞核，呈棕黄色颗粒分布，在GCT中的阳性率为63.33%（19/30），癌旁正常骨肿瘤中的阳性率为16.67%（5/30）。（图1、图2、表1）。

图1  GCT中的p62、MMP-2及Ki-67表达情况（×200）

图2  癌旁正常骨肿瘤中的p62、MMP-2及Ki-67表达情况（×200）

表1  p62、MMP-2及Ki-67在GCT和对照组中的表达情况

2.2  p62、MMP-2和Ki-67相关性分析

     GCT组p62、MMP-2的表达和Ki-67均呈正相关（P<0.05）；p62和MMP-2表达无相关性（P>0.05）（见表3）。

表2  GCT中p62、MMP-2和Ki-67的相关性（n）

3讨论

骨巨细胞瘤（GCT）是一种较为常见、交界性的具有恶变性的原发性骨肿瘤，多表现为恶性肿瘤，具有局部侵袭性生长的特点[5] ，好发于长骨干骺端的局部呈侵袭性生长的原发性骨肿瘤[6]，单发多见，多发GCT鲜有报道。

自噬相关蛋白p62是一种支架蛋白。自噬发生时p62首先与细胞质中泛素化蛋白结合，再与定位于自噬体内膜上微管相关蛋白轻链3(LC3B)形成复合物，被自噬溶酶体降解。自噬过程中p62 蛋白在细胞质中不断被降解，自噬被抑制时，p62蛋白在细胞质中不断积累，因此p62可作为反映自噬活性的标记蛋白[7]。近年来，许多研究显示p62蛋白与多种恶性肿瘤的发生发展关系密切，恶性肿瘤的发生发展主要表现在增殖、迁移及侵袭，p62蛋白可以影响多种肿瘤的增殖、迁移和侵袭来调控肿瘤的发生发展[8]。

MMPs蛋白家族是一类Zn2+依赖的蛋白水解酶家族，能够降解所有的细胞外基质，大量的报道表明，其在多种恶性肿瘤的生成转移中发挥了重要作用[9]。其中以MMP-2尤其重要，研究证实MMP-2高表达与多种肿瘤的恶性行为和预后有关[10]。MMP-2广泛的存在于恶性肿瘤中，当MMP-2分泌至细胞外基质时，采用酶原形式能够辅助相关的肿瘤细胞侵染体内的血管或淋巴管[11]；有研究表明[12] ，MMP-2 在多种恶性肿瘤中具有高的表达。

Ki-67是一种与细胞增殖密切相关核抗原，是评价恶性肿瘤细胞增殖程度最可靠的指标。Ki-67蛋白质能够作为与体内肿瘤细胞增殖有联系的一种细胞核标记物，当肿瘤细胞处于增殖时，其大量的表达于分裂期染色体的表面 ；此蛋白的阳性率越高则表明肿瘤增殖的活性越强[13]。

目前手术是CGT最主要的治疗手段，但是术后残余的GCTSC依然存在活跃的增殖能力，诱导恶性骨微环境循环。本研究结果显示，在骨巨细胞瘤组织中，p62、MMP-2和Ki-67的阳性率均高于对照组，并且差异有统计学意义。在GCT组织中p62、MMP-2与Ki-67 均呈正相关，表明p62、MMP-2促进肿瘤的发生，并在骨巨细胞瘤中两者的高表达提示可能与肿瘤恶性程度，侵袭力及转移有关。

总上所述，p62、MMP-2和Ki-67在骨巨细胞瘤组织中的高表达，三者的联合检测可用于骨巨细胞瘤的临床诊断、预后评估，但在GCT中的具体作用机制尚不明确，有待进一步研究。

参考文献

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基金项目：徐州市第一人民医院 “青苗工程”中青年医学人才培育计划

项目名称：色素上皮衍生因子对小鼠膝骨关节炎模型的保护作用研究