口腔种植术后种植体骨吸收的影响因素分析

【摘要】目的：本研究旨在探讨TNFA-308基因多态性、吸烟、年龄等因素在第II期种植体手术后早期边缘骨吸收中的作用，为临床实践提供理论依据。方法：对44例种植体患者进行对照研究，根据早期边缘骨吸收的有无分为阳性组与阴性组。同时，采集患者口腔黏膜标本并提取DNA，采用PCR方法检测TNFA-308基因型。结果：两组患者中TNFA-308的基因型分布未呈现显著性差异；两组之间的吸烟情况分布存在显著性差异（P=0.027）。多因素Logistic回归分析显示，吸烟组相较于非吸烟组，发生骨吸收的风险增加了8.403倍（P<0.05）。结论：吸烟可能导致种植体手术后早期骨质吸收，但与TNFA-308基因多态性与骨质疏松的发生无显著关联。这一研究结果有助于更好地理解吸烟对骨吸收的影响，并为相关临床实践提供参考。

【关键词】边缘骨吸收；肿瘤坏死因子；基因多态性；种植体

研究指出，与种植体周围骨吸收密切相关的因素包括吸烟、感染、力学负荷、骨质及代谢疾病等。然而，在埋植式种植术中，由于无感染、无机械负荷等因素，目前尚未确定其他可导致骨吸收的因素。然而，临床实践中观察到在种植体周围存在早期骨吸收现象，具体原因尚不清楚，但提示骨吸收的发生可能与个体因素有关[1-3]。肿瘤坏死因子（TNF）被发现具有促进骨吸收的作用，它可以抑制骨胶原的合成，而巨噬细胞分泌的炎性介质参与机体的免疫炎症反应。TNFA基因启动子区308位点的突变可导致TNF-α水平升高。TNF-308基因多态性位点与骨质疏松、牙周病等多种疾病密切相关。因此，该项目计划在前期工作的基础上，以TNF-308基因多态性、吸烟、年龄等为切入点，探讨影响种植体早期骨吸收的遗传因素[4]。通过进行多因素分析，该研究旨在找出影响种植体早期骨吸收的风险因素，为临床种植术及修复方案的制定提供理论依据。深入了解这些遗传因素及其他相关因素对骨吸收的影响，有助于为种植术后的预防和治疗提供更加个体化和有效的方案。

1资料与方法

1.1一般资料

本研究选取了在2022年1月至2023年1月期间在本院种植外科接受植牙手术的病人，均经过病人和家人同意并签署同意书。入选标准包括：①患者未患有全身性疾病；②口腔粘膜未见炎性及病理性损伤，残存牙齿对齐，未发现牙周病变，松动程度在Ⅱ级以下；③术中未发生穿孔、感染，也没有进行上颌窦提升、牙槽嵴增高、植骨等手术。研究对象包括：年龄、性别、骨质量、种植体类型（Frialit-2、IMZ）；病人的吸烟史，女性病人的月经情况。研究对象为40名汉族患者，其中有25名男性和15名女性；年龄分布在20至76岁之间，平均年龄为47.85岁；上颚植入58颗种植体，下颚植入67颗种植体。

1.2边缘骨的测量方法

（1）电子测量尺是由第四军医大学正畸科与电子系合作研制的通用测量工具，专为实现对任意平面图像的测量而设计。

（2）测量步骤包括：①使用UMAX专用扫描仪将受试者在I期手术后及II期术前的X线片输入电脑，生成JPG格式或BMP文件；②测量影像上植入物未扫描前的实际长度，并以植入物长度为“比例尺”；③分别在第一次种植时测量种植体顶缘与牙槽嵴之间的距离，以及第二阶段术后种植体顶缘与牙槽嵴的距离；④将术前与术后测量值相减，得出牙槽嵴吸收高度。如图1，2

图1 测量I 期手术后种植体底部距牙槽嵴的高度

图2 测量种植体Ⅱ期手术前种植体底部距牙槽嵴的高度

1.3分组

在18例边缘骨吸收阳性的病例中，有1个或多个种植体的牙槽嵴高度吸收超过了0.5毫米。相比之下，26例边缘骨吸收不明显的病例中，所有病例的牙槽嵴高度都在0.5毫米以内。

1.4样本收集与DNA提取

使用无菌棉签取双侧颊黏膜拭子，Chelex-100提取DNA。

1.5肿瘤坏死因子TNFA-308基因型测定

本研究采用NcoI限制内切酶酶切技术对TNFa-308进行PCR扩增和分型。引物A的序列为5'-AGG CAA TAG GTT TTG AGG GCC AT-3'，引物B的序列为5'-TCC TCC CTG CTC CGA TTC CG-3'，引物B由上海生工生物工程有限公司（Shanghai Biochechnology Co.）合成。在PCR扩增过程中，加入适量的引物A和B，分别为0.15µL、dNTPs 2μL、Mg1.2μL、PCR缓冲液2μL、0.2μL Taq DNA聚合酶、2.5μL的模板DNA，并将其加入PCR扩增器中。以DNA Ladder Marker为引物，加入NcoI内切酶0.2μL、1μL、0.1%BSA1μL、无菌去离子水补充总量至10μL，进行37℃水浴不少于20小时的酶切反应。酶切产物通过7% PAGE凝胶电泳检测，并在银染后读取结果。

1.6基因多态性结果分析

通过PCR扩增，得到了一个长度为107 bp的目的基因片段。通过酶切分析，成功鉴定出基因的两个等位基因类型，分别为Ⅰ型和Ⅱ型。在107 bp的片段中，具有特定位点的被确认为Ⅰ型等位基因，而酶切后仍维持107 bp长度的被确定为Ⅱ型等位基因[5]。图3详细展示了三种不同的基因型，包括阴性纯合子（I/I）在第9泳道呈现107 bp，杂合子（I/II）在第2泳道呈现107 bp，以及正纯合子（II/II）在第13泳道只呈现107 bp。TNFa-308/N CoI酶切图3进一步验证了这些基因型，第9泳道和第2泳道分别与DNA Ladder Marker一致，确认为阴性纯合子 I/I基因型和杂合子 I/II基因型。此外，第6泳道只出现87 bp，确定为阴性纯合子 I/I基因型，而第13泳道只出现107 bp，为阳性纯合子Ⅱ/Ⅱ基因型。

图3 TNFa-308/NcoI 酶切电泳图

1.7统计学分析

对实验结果使用SPSS 23.0进行了统计分析。采用连续性校正的卡方检验对两组进行比较；同时，使用多元logistic回归方法对影响因子进行比率分析。

2结果

所有患者都经过了一段较长的愈合期，以确定骨结合和种植体的稳定性，然后进行二期修复，并没有出现感染和穿孔等并发症。在125个种植体中，有22个种植体出现了早期边缘骨吸收，占17.6%。卡方检验显示，两组间 TNFA基因型无显著差异，但吸烟组有显著差异（表1）。采用多元 logistic回归分析方法，对影响骨吸收的相关因素如年龄，骨质，绝经，基因，吸烟等进行了多元 Logistic回归分析。具体结果见表2。

表1 2组边缘骨吸收相关因素比较例

表2 2组相关因素的多元logistic回归分析

3讨论

研究中指出，目前临床上最常用的植入系统是埋植系统，包括Frialit-2、IMZ、Branemark、Replace、Xive等。然而，有关不同植入系统对早期边缘骨吸收的影响的研究尚未进行。在前期研究中，发现TNFA-308基因多态性与吸烟与早期边缘骨吸收之间存在相关性。通过将年龄、骨质、绝经期女性等多个因素纳入多因素分析，得出吸烟与骨吸收之间的相关性为8.403，充分表明吸烟是影响骨吸收的一个重要危险因素。然而，TNF基因型的相关性仅为4.329，且没有统计学意义，不能解释其与骨吸收之间的关系。

前期研究发现吸烟可能是导致种植体周围骨吸收的危险因素，其相对风险为8.403 (P<0.05)。最新的研究进一步强调了吸烟对骨代谢的影响[7-9]。研究结果表明，吸烟能够调控骨细胞增殖，上调转录因子c-fos，调控骨基质蛋白的合成，从而影响骨代谢。此外，吸烟还促进破骨细胞的分化，进而加速骨吸收的过程。因此，香烟烟雾可能通过对骨重塑的影响，促使早期边缘骨吸收的发生。吸烟对骨细胞和骨代谢的负面影响可能是导致骨吸收的重要机制之一。该研究结果不仅在理论上拓展了我们对吸烟与骨健康关系的认识，而且为制定预防和治疗早期骨吸收的策略提供了重要的实证支持。在临床实践中，特别关注吸烟者的骨健康，并采取相应的干预措施，可能有助于减缓或预防早期骨吸收的发生。

该研究认为TNF-α基因启动子区域的多态性可能会影响该因子的表达水平，并与多种疾病相关。为了深入研究这种关系，研究人员选择了66例不吸烟的种植体患者，探讨了TNF-α基因启动子位点（G-308A）的单核苷酸多态性与早期种植体失败的关系。然而，结果显示启动子位点（G-308A）的单核苷酸多态性与早期种植体失败无关[7]。研究人员认为，在骨吸收发展中，可能有其他细胞因子的多态性对于早期边缘骨吸收更为重要。相反，另一项研究发现IL-1B-511Ⅱ/Ⅱ基因型的患者更容易发生边缘骨吸收，并且有严重吸烟史的患者对种植体早期边缘骨吸收的发生有一定的危险性。本研究是首次对TNFA-308基因多态性与种植体早期边缘骨吸收的相关性进行研究，结果表明TNFA-308位点的多态性与早期边缘骨吸收的发生可能无关[10-11]。可能的原因是研究者仅分析了TNFA基因其中一个启动子区域多态性的单一作用，并且由于TNFA基因位于MHC基因组内，其与人类白细胞抗原A1-B8-DR3-DQ2单倍型关联，MHC基因簇对TNFa的交错调节效应可能在早期边缘骨吸收的发展中发挥关键作用。

有学者认为，绝经后女性更容易发生骨质疏松，其主要特征包括骨吸收大于骨形成、小梁骨丢失以及骨密度降低等。然而，根据我们之前的研究结果，发现绝经后女性与种植体缘骨吸收并无明显相关性。这可能与绝经后女性绝经患者数量较为有限有关，因此需要进行更为深入的研究。

综上所述，本研究结果表明：TNFA-308基因多态性尚不能被视为种植体早期骨吸收的相关因素，而吸烟则被确认为早期骨吸收的危险因素。

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作者简介:杜艳锋 1983.10.15    男，汉族;

籍贯: 河北邯郸市  学历: 本科  职称:  副主任医师

研究方向:口腔种植术后种植体骨吸收的影响因素分析

身份证 号:130434198310154496