肿瘤病理观察中免疫组化检测方法的研究

【摘要】目的：肿瘤病理观察中免疫组化检测方法的应用效果。方法：2022年9月-2024年3月，以80例食管癌为研究对象，在患者意识清醒参与研究后，经患者同意采集癌灶组织与癌灶旁正常组织，采用免疫组化检测方法完成组织病理学检测，统计食管癌病灶组织、癌灶旁正常组织的免疫组化检测结果，分析食管癌病灶中的三结构域蛋白家族 24（TRIM24）、5 次跨膜的胆固醇结合糖蛋白（CD133）阳性表达率和病理学参数的相关性。结果：食管癌病灶组织的TRIM24阳性表达率是50.00％、CD133阳性表达率是30.00％，食管癌病灶组织的TRIM24阳性表达率、CD133阳性表达率均大于癌灶旁正常组织（P＜0.05）。不同组织学类型、不同TNM分期、不同分化程度、不同浸润深度、是否淋巴结转移食管癌患者的TRIM24阳性表达率存在差异（P＜0.05）；不同组织学类型、不同TNM分期、不同分化程度、是否淋巴结转移食管癌患者的CD133阳性表达率存在差异（P＜0.05），不同浸润深度食管癌患者的CD133阳性表达率比较无差异（P＞0.05）。结论：免疫组化检测可在食管癌诊断与病理观察中发挥显著作用，有利于临床评估食管癌患者的病情严重程度，指导临床进行个体化治疗。

【关键词】：食管癌；免疫组化检测方法；三结构域蛋白家族 24；5 次跨膜的胆固醇结合糖蛋白

食管癌属于全球常见恶性肿瘤之一，发病率排第八位，死亡率排第六位[1]。我国属于食管癌高发国家，发病率在全国恶性肿瘤中排第五位，死亡率在全国恶性肿瘤中排第四位[2]。流行病学显示，我国男性的食管癌发生率排第四位，女性的食管癌发生率排第七位，死亡率均排第四位[3]。结合病理类型可将食管癌分成鳞状细胞癌、腺癌，其中食管腺癌高发于欧美多个国家和地区，食管鳞癌主要在中国等地区发生，发生率在所有食管癌中占90％以上[4]。食管癌发病存在鲜明地域差异，我国河南、河北、山西是高发区域。食管癌是致命性癌症，患者的五年生存率只有18％。食管癌预后较差，会对患者生命健康造成严重威胁。尽早识别食管癌的存在，尽量让更多食管癌患者在早期得到有效治疗，是提高患者五年生存率的唯一方案。病理学检查是食管癌的金标准诊断方法，但病理学所用检测方法也会对病理学观察结果造成影响，会对食管癌针对性、个体化治疗造成一定干扰。免疫组化检测方法近年来在多种恶性肿瘤的病理学检查中广泛应用，可识别多种免疫组化指标，结合指标变化辅助诊断疾病，评估病情严重程度，指导临床实施个体化治疗。

1·资料与方法

1.1一般资料

2022年9月-2024年3月，以80例食管癌为研究对象。男性47例、女性33例；年龄37岁-69岁，平均（53.38±5.21）岁；体重指数18.34-27.86kg/m2，平均（23.10±1.16）kg/m2。纳入标准：（1）符合《中国早期食管癌及癌前病变筛查专家共识意见(2019年,新乡)》中的食管癌诊断标准，临床诊断满足以下任何一项，吞咽食物时自觉存在异物感、胸骨后疼痛、哽咽感、明显吞咽困难，食管造影识别食管黏膜局限性异常增粗、食管局部管壁僵硬、食管充盈缺损、食管黏膜龛影等，胸部CT识别食管管壁环形增厚、不规则增厚；（2）手术病理学结果显示食管癌；（3）年龄信息是35-80岁；（4）入院时自觉存在吞咽困难与体重减轻等异常表现；（5）对研究知情，签署同意书。排除标准：（1）有其他恶性肿瘤；（2）有出凝血障碍；（3）有精神障碍；（4）预计生存时间小于6月；（5）参与研究前已经接受过食管癌相关治疗。

1.2方法

80例患者均在知情后配合完成标本采集，采集食管癌病灶组织以及食管癌病灶正常组织，成功采集组织后置入10％福尔马林中固定，常规实施脱水、浸蜡，实施石蜡包埋操作。所有玻片均属于粘附载玻片，常规处理洁净，切片厚度控制在 4µm，每个蜡片均连续切片4张，其中一张实施HE染色，安排两位病理学医师进行组织病理学诊断，剩下三张切片实施免疫组化检测。所有切片在检测前，均在55℃环境下持续烘烤至少3小时。通过免疫组化检测技术完成三结构域蛋白家族 24（Tri-domain protein family 24，TRIM24）、5 次跨膜的胆固醇结合糖蛋白（Cholesterol-binding glycoprotein with five transmembrane times，CD133）检测，两项指标严格遵循二步法免疫组化试剂盒的说明书实施。取厚度 4µm的切片，实施脱蜡操作直至水化，将切片放在3%H2O2 去离子水中，将内源性过氧化物酶的活性有效消除，在切片上滴加适量5％牛血清白蛋白，在室温环境下持续进行15min孵育，然后在切片上滴加适宜比例稀释后的一抗，在4℃环境下过夜。在切片上滴加适量5％牛血清白蛋白，在室温环境下持续孵育15min，然后在切片滴加适量聚合物辅助剂，在室温环境下持续孵育15min。在切片上滴加适量二抗，在37℃环境下持续进行30min孵育，应用DAB显色液完成显色操作。将处理后切片送入苏木素染液中实施复染，在盐酸乙醇溶液中实施分化，在梯度酒精中实施脱水，将切片送入二甲苯溶液实施透明，通过中性树胶完成封片。采用磷酸缓冲盐溶液代替一抗，充当阴性对照。

在光学显微镜下进行切片观察，并结合所得光学图像信息进行判断。TRIM24：若是呈阳性表达，则可见细胞核内部有黄绿色荧光存在，荧光点状分布；苏木素染细胞核是蓝色，背景十分清晰，无其他着色存在。CD133：染色十分清晰，可充分凸显出背景的棕黄色则代表阳性。随机抽取四个高倍视野（×400）的100个细胞，结合半定量积分评价染色结果，统计阳性细胞的数量并计算百分率，若阳性细胞百分率＜10％则是（-）、若阳性细胞百分率10％-50％则是（+）、若阳性细胞百分率＞50％则是（++），其中（+）、（++）均属于阳性表达，统计该类切片的数量并计算百分率。

1.3统计学方法

通过SPSS26.0统计比较，计数资料[n（%）]表示，χ2检验，P＜0.05是差异有统计学意义。

2·结果

2.1食管癌病灶组织、癌灶旁正常组织的免疫组化检测结果统计

食管癌病灶组织的TRIM24阳性表达率、CD133阳性表达率均大于癌灶旁正常组织（P＜0.05）。见表一。

表1 食管癌病灶组织、癌灶旁正常组织的免疫组化检测结果

2.2食管癌病灶中的TRIM24、CD133阳性表达率和病理学参数的相关性

不同组织学类型、不同TNM分期、不同分化程度、不同浸润深度、是否淋巴结转移食管癌患者的TRIM24阳性表达率存在差异（P＜0.05）；不同组织学类型、不同TNM分期、不同分化程度、是否淋巴结转移食管癌患者的CD133阳性表达率存在差异（P＜0.05），不同浸润深度食管癌患者的CD133阳性表达率比较无差异（P＞0.05）。见表二。

表2 食管癌病灶中的TRIM24、CD133阳性表达率和病理学参数的相关性

3·讨论

伴随着我国医学技术的发展，食管癌的临床诊断、手术治疗、综合治疗等均进入全新阶段，但食管癌的治疗效果并不让人满意。有调查发现，食管癌1年生存率只有75％，5年生存率只有30％。术后肿瘤转移、肿瘤复发，是导致食管癌根治术患者死亡的主要原因，这代表患者存在术前诊断不到位，并未明确病情严重程度，未及时发现肿瘤细胞扩散、隐匿性转移。病理学依然是临床确诊食管癌的理想方法，属于金标准诊断方法。但结合临床应用可知，采用常规方法进行病理学观察，纵然可确诊疾病，明确疾病性质，但在评估病情严重程度方面存在一定缺陷，故需寻找更理想的病理学诊断技术。免疫组化技术是近年来新兴的免疫标记技术，存在操作简单、特异性较强、敏感性较高，可有效结合形态与抗原定位等多种优点，故在肿瘤病理学鉴别诊断中广泛应用。

TRIM24、CD133均是通过免疫组化检测技术获取的指标。其中TRIM可辅助人体维持正常生理功能，参与肿瘤在内的疾病发生发展调控过程。多数TRIM蛋白自N端-C端的顺序是RING锌指结构，由1个或2个B-box结构与1个卷曲螺旋结构域构成，也就是RBCC 结构域。TRIM24属于TRIM家族成员之一，处于染色体7q34，自胚胎时期开始表达，在人体广泛分布，如乳腺、骨骼、前列腺、肾脏、肝脏等。有研究[5]指出，TRIM24在胃癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中均有高表达表现，和患者不良预后存在明显关系。此次研究发现，TRIM24在食管癌中有高表达，阳性表达率大于癌灶旁正常组织。

综上可知，在食管癌病理学观察中应用免疫组化检测技术，具有显著价值。

参考文献：

[1] 梁宗英,赵宝山,郑竞雄,等. 乙酰基转移酶KAT2A和Survivin蛋白乙酰化在食管癌中的相关性研究[J]. 临床肿瘤学杂志,2023,28(1):16-22.

[2] 国家消化内镜专业质控中心,国家消化系疾病临床医学研究中心(上海),国家消化道早癌防治中心联盟,等. 中国早期食管癌及癌前病变筛查专家共识意见(2019年,新乡)[J]. 中华消化内镜杂志,2019,36(11):793-801.

[3] 林晓明,陈正鲁,李淑慧,等. 驱动蛋白家族20A和程序性细胞死亡因子4在食管癌组织的表达及临床意义[J]. 中华实验外科杂志,2024,41(3):575-577.

[4] 邹陈蔚,张季,吴淼淼,等. ATP6V1A在食管癌及食管上皮内瘤变组织中的表达及其临床意义[J]. 东南大学学报（医学版）,2021,40(3):366-370.

[5] 黄杰,金小琴,黄昕,等. 烟酰胺N甲基转移酶和肿瘤坏死因子受体相关蛋白1在食管癌组织的表达及临床意义[J]. 中华实验外科杂志,2023,40(11):2351-2353.