多重PCR技术在临床呼吸道病原体快速检测中的应用研究

摘要：目的：探究多重PCR技术应用于呼吸道病原体快速诊断的意义，在临床中提升呼吸道感染疾病的诊断速度。方法：对2025年在我院就诊的呼吸道感染病人进行多重PCR检测，其中包括甲流病毒(FluA) 、乙流病毒（FluB）、呼吸道合胞病毒（RSV）、副流感病毒Ⅰ型和III型（PIVⅠ, PIVⅢ）、腺病毒（ADV）、肺炎支原体（MP）、百日咳杆菌（BP）以及新冠病毒（SARS-CoV-2）。统计每一种病毒检测总数和阳性率，研究多重PCR技术应用至临床诊断上所起到的作用。结果：共收集呼吸道标本3525～3964例，各种病原体阳性率有明显差别。流感病毒阳性的最多（27.1%），其次为合胞病毒（5.6%）、腺病毒（5.2%）、副流感病毒Ⅰ型（1.5%）、副流感病毒Ⅲ型（1.9%）、鼻病毒（0.5%）、巨细胞病毒（2.2%）、腺病毒（5.2%）、新冠病毒（3.6%）。多重PCR一次性可对多个病原体进行检测，加快临床诊断速度。结论：多重PCR技术可以同时对多个病原体进行检测，灵敏度高、准确、临床意义大，有助于及时诊治、治疗药物的选择以及感染防控等。

1. 资料与方法

1.1 研究对象

本文回顾性搜集了2025年在我院发生的呼吸道感染患者的标本共3964例，因各种病原体检测指征不同，个别项目的检测数量有所区别如表1所示，在入选标准中包括：有发热、咳嗽、咽痛、咳痰增多、呼吸困难等呼吸道感染症状的患者并且由医生诊断需要做病原学检查。而排除标准如下：①样本数量不够或者取得不合理不能够实施统一化的检测；②取样以后送检以及运输过程中出现问题造成结果不稳定难以准确判断的；③患者近期内有过抗病毒类、抗生素类等药物使用历史使病原体核酸含量大幅下降难以准确判断的情况。本文遵守相关的伦理准则，在进行样本收集的过程当中，均得到了病患及其监护人的书面知情同意书；在分析数据的过程中也进行了脱敏化操作。

1.2 检测方法

本文所使用的是经过国家药监局审批的商业化的多重PCR试剂盒，在同一样品上可以一次性检测出以下9种常见的呼吸道病原体：甲型流感病毒（FluA）、乙型流感病毒（FluB）、呼吸道合胞病毒（RSV）、副流感病毒Ⅰ型（PIVⅠ）、副流感病毒Ⅲ型（PIVⅢ）、腺病毒（ADV）、肺炎支原体（MP）、百日咳杆菌（BP）以及新型冠状病毒（SARS-CoV-2）。

样品采集：依照规定流程在临床护士的参与下使用无菌鼻咽拭子、咽拭子采集样本，尽快放入病毒采集管中，在尽可能短的时间内送入实验室检验，若不能立即检验则于冰箱4℃条件下存放≤24h时间。

核酸提取：通过磁珠法全自动核酸提取仪对病原体核酸进行提取保证其纯度及完整能达到荧光PCR扩增的要求。

PCR扩增及检测：按试剂盒说明书要求配制反应液，设定循环参数，使用荧光定量PCR仪进行PCR扩增和读取荧光信号。

阳性判断：用设定的阈值循环数（Ct）≤38作为判定是否阳性的依据，Ct值＞38判定为阴性并结合临床症状进行分析。

1.3 数据统计

使用SPSS 25.0统计软件进行分析，各种病原菌感染率用百分比来表示，用描述性统计的方法对各种病原菌监测数量以及阳性数量进行对比。

2. 结果

2025年我院呼吸系统病原体检测结果如下：检测总数量中，甲流病毒（FluA）、乙流病毒（FluB）都达到了3964例，RSV、PIVⅠ、PIVⅢ、腺病毒都是3525例，肺炎支原体以及百日咳杆菌3924例，新冠病毒770例。实验结果分析，各种病原体检测的阳性率相差较大。流感A型阳性样本数量为1073份占总检测数的比例为27.1%，流感B型只有两个样本即0.05%，呼吸道合胞病毒阳性有197个也就是5.6%，副流感1型阳性53份，占1.5%，副流感3型阳性66份，占1.9%；腺病毒感染185份，占5.2%，肺炎支原体85份，占2.2%，百日咳18份，占0.5%，新型冠状病毒28份，占3.6%，多重PCR可以一次检测出多个病原体的结果，方便实用，检测时间大大缩减，适用于临床急查的需求。

表1  2025年呼吸道病原体检测数量及阳性数

3. 讨论

呼吸道感染致病菌型多样，而现有培养、抗原检测或者单一病原体的PCR等常规检验手段则会面临耗时久、敏感性低以及不能对多种病原体进行联合检测等问题。多重PCR可以在一次试验中对多个病原体进行共同检验，节约检验周期、提升诊断速度的同时也能给临床上用什么药物、采取何种防控措施等方面提供参考依据^[1]。

本研究发现，甲型流感病毒为2025年呼吸道感染主要病原菌，阳性率为27.1%，与季节性流感流行特点相符合，乙型流感病毒阳性率很低，说明了本年的乙型流感比较平缓，RSV、腺病毒以及PIVⅠ、PIVⅢ的阳性率均低于10%，肺炎支原体和百日咳杆菌阳性率分别是2.2%和0.5%，可见其呼吸系统病毒跟细菌感染的情况也存在区别。新冠病毒阳性率为3.6%，意味着社区还有零星散在感染者，应继续关注^[2]。

多重PCR技术的优点是它高灵敏度、高度特异性可同时检测多种病毒及细菌核酸，大大减少假阴性的概率出现；出报告时间快，在标本收集后，可以做到在几小时之内获得检测结果，给及时进行处理带来方便；有较强的临床指导作用，可结合阳性结果来决定是否需要抗病毒或抗感染治疗，避免滥用抗生素的现象发生等等；但是多重PCR也有不足之处，就是它的检测费用昂贵，短时间内无法推广到基层医院；对样本的标准较高，采集过程不规范会导致结果失真；面对新型的变异病毒或者未知病原体可能会遗漏掉^[3]。所以今后可以利用自动化高通量检测设备以及电子健康信息系统开展对呼吸道病原菌进行即时监控、联网，进而提高临床诊疗水平以及疫情应对速度。

4. 结论

多重PCR应用于临床呼吸道病原体快速鉴别有明显优势，在一个反应体系内即可对多个病原体进行鉴定，简单方便、快捷，灵敏度高，特异性强。能有效提升呼吸道感染疾病的早期筛查速度。可作为临床药物使用的参考，减少抗生素滥用，也为控制感染与疾病预防提供了理论依据。应大力开展该技术的应用研究和发展，对三甲公立医院及重点监测单位推荐使用，结合临床判断以及流行病学调查，优化呼吸道感染疾病预防措施及公共安全管理，提升医疗服务质量和疾病防控的能力。

参考文献：

[1]马新野.基于等温扩增技术的四种呼吸道病原体的检测与应用[D].湖南工业大学,2023.

[2]李疆帅.核酸现场快速检测技术在重要病毒性传染病检测中的应用研究[D].北京工业大学,2021.

[3]李格.呼吸道常见病原体多重实时荧光定量PCR与RPA-CRISPR-Cas12a技术检测方法的建立与临床评价[D].安徽医科大学,2025.