不同采样法对洁净室表面微生物检测效果的比较研究

摘要：洁净室在制药、电子、航空航天等对环境洁净度要求极高行业广泛应用，其表面微生物污染会直接影响产品质量与生产安全。例如：在制药行业，药品生产过程中如果洁净室表面微生物超标，会导致药品受到污染并引发患者感染等严重后果。所以，准确且有效地检测洁净室表面微生物含量十分重要。目前，接触皿采样法、拭子采样法、淋洗采样法是洁净室表面微生物检测常用方法，不过不同方法在检测效果上存在差异。深入比较这些方法的检测效果，有助于根据洁净室的具体情况选择合适的采样方法，提高检测的准确性和可靠性。

关键词：不同采样法；洁净室；表面微生物检测；比较

洁净室作为医疗、制药、半导体等高洁净度要求领域的关键环境，其表面微生物污染水平直接影响产品质量与生产安全。因此，本文就对不同采样法对洁净室表面微生物检测效果的比较进行研究，从而确保洁净室表面微生物检测工作的顺利开展。

1不同采样法的原理与操作流程

1.1接触皿采样法

接触皿采样法是一种直接且常用洁净室表面微生物检测方法，它的原理是利用含特定培养基接触皿，把接触皿培养基表面直接和洁净室检测表面充分接触，让表面微生物转移到培养基上，在适宜温度和环境条件下培养一段时间后，培养基上会生长出微生物菌落，对菌落进行计数和分析就能得出检测表面微生物数量。操作流程如下：首先要准备好直径为55mm且内部装有大豆酪蛋白消化物琼脂培养基的接触皿，采样前需严格按无菌操作要求做好准备工作，将接触皿打开让培养基表面和检测表面紧密接触并保持10秒钟，以此确保表面微生物能有效转移到培养基上，每个检测区域要选取至少5个采样点且每个采样点都要用新的接触皿，采样完成后要立即将接触皿盖上并在30-35℃的环境下培养48小时，最后通过肉眼观察并计数培养基上的菌落数量，经大量实验数据表明该方法对表面微生物数量在1-100CFU/cm²的洁净室检测效果较好且检测准确率能达到90%以上^[1]。

1.2拭子采样法

拭子采样法是借助消毒拭子去擦拭待检测表面，以此将微生物转移到培养基中进行培养。具体操作情况如下，先选取无菌拭子并用无菌的0.9%氯化钠溶液浸湿，接着在取样点处选择大约25cm²的取样面进行擦拭，擦拭过程中要保证拭子充分接触表面，可按照“S”形或螺旋形等一定方向和顺序擦拭，擦拭完成之后迅速把拭子放入无菌试管中并密封好，随后向试管中加入10ml0.9%生理盐水，使用旋涡振荡器充分振荡，让拭子上的微生物充分转移到生理盐水中，再取5ml振荡后的供试液采用薄膜过滤法过滤，把滤膜取出让细菌滤面朝上贴于相应的培养基平板上，如：TSA（胰酪大豆胨琼脂培养基）平板用于细菌培养，SDA（沙氏葡萄糖琼脂培养基）平板用于真菌培养。最后将平板置于适宜温度的培养箱中培养，观察并记录菌落数，计数结果的2倍就是擦拭取样活菌计数结果^[2]。

1.3淋洗采样法

淋洗采样法原理是用适量无菌淋洗液冲洗洁净室检测表面，让表面微生物随淋洗液被带走，接着对收集到的淋洗液做过滤培养和计数，以此间接得出检测表面微生物数量，操作流程上，先准备好无菌淋洗液，通常采用含0.1%蛋白胨的生理盐水，对于面积小于1m²的较小检测表面用100ml淋洗液冲洗，对于面积较大检测表面按每平方米200ml用量冲洗淋洗液，将淋洗液均匀喷洒在检测表面后用无菌海绵或纱布轻擦表面，确保微生物充分转移到淋洗液中，收集淋洗液后用孔径0.45μm的无菌滤膜过滤，把滤膜放于大豆酪蛋白消化物琼脂培养基上，在30-35℃环境下培养72小时。不同面积检测表面淋洗采样法相关数据如表1所示。从数据能看出随着检测表面面积增大，淋洗采样法检测准确率略有下降，但总体来说，该方法对大面积表面微生物检测有一定优势^[3]。

表1：不同面积检测表面淋洗采样法的相关数据

2不同采样法检测效果的比较

2.1回收率比较

通过精心开展一系列实验来对比不同采样方法，在具有不同含菌量的载体之上回收率的具体情况。实验过程中选取低含菌量（具体为1cfu/25cm²以及10cfu/25cm²）和高含菌量（具体为50cfu/25cm²以及100cfu/25cm²）两种不同含菌量水平载体进行相关测试。针对两种不同含菌量的载体采用接触皿采样、淋洗采样、拭子采样三种方法开展实验。经对实验数据详细分析统计后发现，不管是在低含菌量还是高含菌量载体上，这三种采样法回收率差异均无统计学意义（P>0.05）。进一步深入研究实验结果后可知，三种采样法在低含菌量物体表面的采样回收率均高于高含菌量物体表面。并且这三种采样法在低含菌量物体表面的采样回收率均能达到70%以上，这样的回收率完全能够满足相关标准的要求。

比如：在某实验中，以金黄色葡萄球菌作为测试菌种，在低含菌量的不锈钢载体表面，接触皿采样法的回收率为85%、淋洗采样法为82%、拭子采样法为80%，在高含菌量的同一载体表面，接触皿采样法的回收率为78%、淋洗采样法为75%、拭子采样法为73%。这表明在低含菌量的情况下三种方法都能够较好地检测到微生物，而在高含菌量的时候回收率有所下降不过仍能够保证检测的有效性^[4]。

2.2适用性比较

不同采样方法对具有不同材质特性和表面粗糙度状况的载体而言适用性差异显著，接触皿采样法针对如：玻璃这类相对表面光滑的载体时平均回收率最高，原因是光滑表面能让接触碟培养基与载体表面充分接触，在这种充分接触情况下微生物更易附着在培养基上，比如：在进行玻璃载体相关实验过程中，接触皿采样法回收率能超90%，如此高回收率足以准确检测出玻璃载体表面微生物含量情况。

拭子采样法具备一定优势适用于各种不同材质和不同形状的表面，但面对粗糙表面时存在一定局限性，因为在粗糙表面上拭子可能无法完全接触到所有微生物导致其回收率相对较低，例如：在粗糙木质载体表面采样时，拭子采样法回收率可能仅处于60%-70%区间，如果因木质表面有独特纹理和孔隙结构，使拭子擦拭时难以全面触及所有区域，影响微生物采集效果。

淋洗采样法在处理聚四氟乙烯这类粗糙载体时平均回收率最高，是因为在淋洗全过程中生理盐水能充分冲洗粗糙表面微生物，让微生物顺利进入供试液中，在针对聚四氟乙烯载体开展的实验中，淋洗采样法回收率大约能达到85%，这样的回收率可有效检测粗糙表面微生物存在情况^[5]。

3.3操作便捷性与成本比较

接触皿采样法在实际应用时优势很显著，它的操作过程十分简便。在整个采样过程中，不需要像高压灭菌锅、超净台这类结构复杂、功能繁多且价格昂贵的大型设备参与。使用这种方法能够大幅度节省人力，操作人员不用花大量精力去操作和维护那些复杂设备。同时，在时间上也能得到有效节约，无需经过繁琐的设备准备和调试等环节。具体来说，只需提前精心准备好接触碟以及合适培养基，然后严格按照既定科学操作流程依次进行采样和后续培养工作，就能完成整个采样检测流程。并且接触皿采样法成本相对比较低，其主要成本支出源于接触碟和培养基的采购这两方面。

拭子采样法在实际操作时比接触皿采样法存在不足，它要先把拭子附着微生物转移到特定培养基，这增加了检测步骤，在转移过程中很容易产生假阳性结果。此外，拭子采样法需借助旋涡振荡器等专业设备完成部分操作，这既增加设备采购成本，也提升操作过程复杂程度，对操作人员专业技能和操作熟练度要求更高。

淋洗采样法在实际操作中相对比较复杂，操作人员需精确控制生理盐水倾注与晃动过程，每个动作的力度、角度和时间都要严格把控，稍有偏差就可能对采样效果产生影响，这种方法还需使用移液枪等精密仪器，这些仪器对操作精准度的要求极高。同时，淋洗采样法对实验环境要求也较高，必须在相对无菌的环境中进行操作，目的是避免外界环境中微生物进入实验样本，进而对实验结果造成污染，该方法成本也相对较高，除购买培养基和相关仪器设备需花费资金外，整个操作过程还会消耗大量生理盐水，这在一定程度上增加了实验成本支出^[6]。

结论：

不同采样方法在洁净室表面微生物检测中各有优劣，在实际应用的时候要依据洁净室具体情况来选择，比如表面材质、粗糙度以及洁净度要求等方面，合理挑选采样方法，以此提高检测准确性与可靠性。未来，随着科技持续不断地发展，会出现更先进便捷且准确的表面微生物采样方法，新技术和新方法将为洁净室表面微生物检测带来新发展机遇，进而进一步保障产品质量和生产安全。

参考文献：

[1]唐帆.生物医药洁净室层流罩常见问题探讨[J].华东科技,2025,(10):68-71.

[2]怀特,库斯,德科,等.洁净室中的气浮粒子沉积：计算产品污染和所需的洁净室等级[J].洁净与空调技术,2025,(03):11-17.

[3]范月娜.微生物洁净实验室的质量监测与控制[J].化工管理,2025,(18):1-4.

[4]李炫,杨峰,陈紫光,等.生物制药厂房洁净度与换气次数的关系的探讨[J].洁净与空调技术,2025,(02):48-52.

[5]忻运,王杰,魏佳鸣.洁净室污染控制策略的研究[J].中国医药工业杂志,2024,55(05):731-735.

[6]陈亚黎,裴文静,范金鹏,等.不同采样法对洁净室表面微生物检测效果的比较研究[J].生物化工,2023,9(01):43-45+56.