循环肿瘤细胞和HHLA2基因在高级别浆液性卵巢癌中的表达及临床意义

摘要：目的：研究循环肿瘤细胞（CTC）和HLA-A2基因在高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）患者中表达情况。方法：对2025年1月至12月在本院诊治的62例HGSOC病例开展前瞻性回顾性研究，将同数量的卵巢良性肿瘤患者作为对照组，利用免疫磁珠分离技术检测血液中的CTC存在状况，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法测定肿瘤组织中的HHLA2 mRNA相对丰度。结果：观察组CTC阳性率为67.74%，较对照组显著升高（6.45%），差异具有统计学意义（P<0.05）；同时，观察组HHLA2基因表达水平为2.86±0.72，明显高于对照组均值1.03±0.25（P<0.05）。统计学分析表明CTC阳性、HHLA2高表达状态分别与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移、腹水形成等恶性指标呈正相关（P<0.05），但是没有发现与年龄有关（P>0.05）。两种标志物阳性的患者群体无进展生存期（PFS）、总生存期（OS）明显缩短，生存获益差（P＜0.05）。经由Cox比例风险回归分析可知，CTC阳性、HHLA2过表达、临床分期高风险三个因素是独立的预后危险因子（P＜0.05）。结论：CTC和HHLA2基因可以成为评价HGSOC疾病发展、预后的重要分子生物学标志物。

关键词：高级别浆液性卵巢癌；循环肿瘤细胞；HHLA2基因；基因表达；临床病理特征；预后

高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)是卵巢上皮性恶性肿瘤中最常见的一种，占所有卵巢癌病例的70%到80%[1]。循环肿瘤细胞（CTC）是来源于原发性肿瘤或者继发转移病灶，在血液系统中广泛分布，并且进入血液循环的细胞[2]。高浆液性卵巢癌（HGSOC）领域里，有关该基因功能的研究还处在初步探索之中，在循环肿瘤细胞（CTCs）上的应用价值以及多靶标联合检测技术的开发等方面，还存在着很多难题需要克服[3]。选择62例高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)患者为研究对象，对外周血循环肿瘤细胞(CTC)的数量同卵巢组织HLA-Ⅱ类分子基因表达量之间的关系展开全面探究，并且剖析它在临床病理特征和预后相关因素方面的机制。目的是寻找新的诊断生物标志物和个性化的治疗方案，给疾病的诊断和治疗提供科学的依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

本文以2025年1月～12月在该院收治的62例高级别浆液性卵巢癌患者为研究对象。所有入选病例均经过术后病理组织学检查确诊，按照《卵巢癌诊疗指南（2022年版）》的规定符合高级浆液性卵巢癌（High-grade Serous Ovarian Cancer，HGSOC）的诊断标准。样本涵盖35至72岁年龄段，平均年龄为（53.6±8.2）岁；按照FIGO分期体系划分，Ⅰ-Ⅱ期与Ⅲ-Ⅳ期的比例分别为29%和71%；在肿瘤分级上，高、中、低分化各占19.4%、40.3%和40.3%；淋巴结转移阳性患者占比61.3%，阴性者占38.7%；腹水的发生率为64.5%，无腹水情况则占35.5%。本研究选择同期在该医院收治的62例卵巢良性肿瘤患者为对照组。卵巢囊腺瘤、畸胎瘤、巧克力囊肿各占38例、16例、8例，全部为术后病理学确诊。患者的年龄分布为33至70岁，平均年龄（52.8±7.9）岁。从独立样本t检验结果可以看出，两组研究对象的基础特征之间没有统计学意义的差别（P＞0.05），具有较好的同质性、可比性。

排除标准，（1）术前已经接受了放疗、化疗、靶向治疗或者免疫治疗等抗肿瘤综合干预的病人；（2）有严重的心肺肝肾功能障碍或者其他重大疾病的人；（3）由于临床数据缺失或者失访而无法追踪的病例；（4）怀孕或者哺乳期的女性受试者。本研究得到学院医学伦理委员会的正式批准，所有参加者亲属都签署过知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 CTC检测

本研究从两组受试者空腹状态下抽取外周静脉血5mL，用EDTA作抗凝剂。在完成样本采集后2h内，按照美国CellSearch系统操作规范和配套试剂盒指南进行检测，即把抗凝全血和磁珠试剂充分混合，然后在磁场作用下进行孵育，用EpCAM特异性识别和磁场分离技术富集循环肿瘤细胞（CTC），再用荧光染色法筛选CK8/18/19阳性、DAPI阳性、CD45阴性CTC，最后用显微镜观察统计结果。检测到≥1个CTC为阳性，无CTC为阴性。

1.2.2 HHLA2基因表达检测

术中采集观察组卵巢癌组织、对照组良性肿瘤组织，液氮冷冻后-80℃保存。Trizol试剂提取总RNA，Nanodrop 2000检测RNA纯度（A260/A280 1.8-2.0）及浓度，逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA（按说明书操作）。qRT-PCR法检测HHLA2基因相对表达量，GAPDH为内参基因，引物由上海生工合成。PCR反应体系20μL（2×SYBR Green PCR Master Mix 10μL、上下游引物各0.5μL、cDNA模板2μL、ddH2O 7μL），反应条件：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火30s，40个循环；95℃熔解15s，60℃保温1min，72℃延伸10s。2^(-ΔΔCt)法计算相对表达量，根据中位数分为HHLA2高、低表达组。

1.3 观察指标

本研究将从以下几方面展开工作（1）比较两组受试者外周血循环肿瘤细胞（CTC）的阳性检出率以及HLA2基因的相对表达水平；（2）探究CTC表达状态（阳性或者阴性）同HLA2基因表达强度在高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）患者身上的分布情况，评判二者同临床病理特点（年龄，国际妇产科联盟分期，组织学分级，淋巴结转移，腹腔积液状况）的关系；（3）对纳入HGSOC患者的前瞻性队列进行追踪，自手术日期起一直持续到2026年12月31日，在门诊复查和电话随访中获取生存状况的信息，记录无进展生存期（PFS）和总生存期（OS），综合分析有关风险因素对疾病预后的影响机制。

1.4 统计学方法

本文用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。计量资料用均值±标准差表示，用t检验分析；计数资料用百分比表示，用χ²检验比较。在生存分析中用Kaplan-Meier法画出生存曲线，用Log-rank检验比较各个组间是否有差异。多因素预后分析用Cox比例风险回归模型来建立。当p值小于0.05的时候，说明结果有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象CTC及HHLA2基因表达水平比较

观察组患者外周血CTC阳性率高于对照组，（P<0.05）；观察组患者卵巢组织中HHLA2基因相对表达量显著高于对照组，（t=18.365，P<0.05）。具体结果见表1。

表1两组研究对象CTC及HHLA2基因表达水平比较

2.2 CTC、HHLA2基因表达与HGSOC患者临床病理特征的关系

CTC阳性、HHLA2高表达均与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移及腹水密切相关（P<0.05）：Ⅲ-Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移、有腹水患者的CTC阳性率及HHLA2高表达率显著升高；二者与年龄无关（P>0.05）。详见表2。

         表2CTC、HHLA2基因表达与HGSOC患者临床病理特征的关系

2.3 CTC、HHLA2基因表达与HGSOC患者预后的关系

62例HGSOC患者随访6-12个月，平均（8.6±2.1）个月，疾病进展18例，死亡10例。Kaplan-Meier分析显示：CTC阳性患者中位PFS（7.2个月）、OS（9.8个月）显著短于阴性患者（10.5个月、12.0个月）（P<0.05）；HHLA2高表达患者中位PFS（7.5个月）、OS（10.0个月）显著短于低表达患者（10.2个月、11.8个月）（P<0.05）。

2.4 影响HGSOC患者预后的多因素分析

Cox回归分析显示，CTC阳性、HHLA2高表达及FIGO晚期（Ⅲ-Ⅳ期）是影响HGSOC患者预后的独立危险因素（P<0.05）。详见表3。

3 讨论

高浆液性卵巢癌（HGSOC）属于一种侵袭性很强、预后较差的恶性肿瘤。对生物标志物在改善患者临床管理中起到的作用进行深入的研究，有重要的意义。循环肿瘤细胞（CTC）是肿瘤远处转移的重要介质，与免疫调节有关的基因HHLA2在HGSOC中协同作用还没有得到充分的研究。选择62例HGSOC病人进行CTC、HHLA2基因表达水平的评价以及临床意义的评价[4]。

研究数据说明观察组循环肿瘤细胞（CTC）检出率比对照组高，而且HLA2基因表达水平也高（P＜0.05）。这说明高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)发生发展过程中这两个指标异常升高与恶性进程有关。CTC阳性以及HLA2高表达同临床分期、组织学分级、淋巴结转移情况、腹水产生存在显著的相关性（P＜0.05），但是和患者的年龄没有明显的相关性（P＞0.05）。已有证据显示，这两个指标可以较好地体现高级别浆液性卵巢癌的疾病发展情况，具有成为预后判定参数的价值，同以往的研究结果相符。生存分析显示CTC呈阳性或者HLA2基因高表达的病人无进展生存期和总生存期都比CTC阴性或者HLA2基因低表达的病人要低(P＜0.05)。经过多因素回归分析可知，CTC阳性状态、HLA2高表达、FIGO分期为晚期都是预后不良的重要独立预测因子（P＜0.05），说明CTC检测和HLA2表达水平可以成为评价卵巢癌患者预后的潜在生物标志物，为个性化治疗方案的制定提供科学依据[5]。

综上所述，CTC和HHLA2基因在高分级浆液性卵巢癌(HGSOC)患者体内有明显的上调表达，二者水平同肿瘤分期、临床预后有关。该两组分子有重要的生物标记意义，可以给疾病的进展评价和个体化治疗方案的制订赋予科学根据。

参考文献：

[1]黄羽棠,杜炜钦,袁冬,等. 连接桥粒斑珠蛋白促进高级别浆液性卵巢癌恶性进展的机制[J].实用医学杂志,2025,41(24):3848-3859.

[2]齐玥,庄连婷,张宇晴,等. 超声组学特征与临床参数联合模型预测高级别浆液性卵巢癌淋巴结转移[J].中国医学影像技术,2025,41(11):1795-1799.

[3]向丽,王冬花,王平,等. 同源框B8通过调节赖氨酸脱甲基酶6B介导C/EBPα组蛋白H3K27me3修饰促进高级别浆液性卵巢癌转移的实验研究[J].中国医学装备,2025,22(11):164-173.

[4]杨承清,曾华龙,罗小辉,等. 卵巢癌治疗后血小板减少的影响因素及列线图预测模型构建[J].癌症进展,2025,23(21):2501-2505.

[5]柴景瀚,丁慧青. SCRN2调节高级别浆液性卵巢癌侵袭的机制探讨[J].现代实用医学,2025,37(10):1003-1009.