三种常见恶性肿瘤的淋巴细胞亚群特征比较研究

【摘要】：目的： 本研究通过流式细胞术分析甲状腺恶性肿瘤（TC）组、乳腺恶性肿瘤（BC）组及鼻咽恶性肿瘤（NPC）组患者外周血淋巴细胞亚群的分布特征，探讨三种类型肿瘤的免疫微环境差异。方法： 收集甲状腺恶性肿瘤（94例）、乳腺恶性肿瘤（126例）、鼻咽恶性肿瘤（118例）患者及临床诊断为非肿瘤的患者（主要为炎症或良性疾病患者71例）的外周血样本，检测CD16+CD56+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+的比例及CD4/CD8比值，并进行组间比较。结果： 三种恶性肿瘤的免疫细胞谱存在显著差异。NPC组的CD3+CD8+细胞比例显著高于其他两组（P<0.05），且CD4/CD8比值最低。BC组的CD3+CD4+细胞比例和CD4/CD8比值最高。TC组的NK细胞比例显著低于其他两组（P<0.05）。与非肿瘤对照组相比，三种肿瘤均表现出不同程度的免疫失调。结论： 甲状腺恶性肿瘤、乳腺恶性肿瘤、鼻咽恶性肿瘤具有独特的淋巴细胞亚群特征，这些特征反映了其肿瘤微环境的不同免疫状态，为个体化免疫治疗策略的制定提供数据支持与理论指导。

关键词：恶性肿瘤；淋巴细胞亚群；流式细胞术；肿瘤微环境；免疫特征

恶性肿瘤的发生、发展与机体免疫系统之间的相互作用[1]密切相关。恶性肿瘤微环境中的免疫细胞组成[2]]和功能状态，直接影响恶性肿瘤的进展、转移以及对治疗的反应[3]。近年来，免疫治疗，特别是免疫检查点抑制剂[4]，在多种肿瘤中取得了突破性进展。然而，不同起源、不同病理类型的恶性肿瘤其免疫微环境存在高度异质性[5]，这导致了免疫治疗疗效的显著差异[6]。

流式细胞术是一种能对单细胞定量分析的新技术，具有较高的精确性，能够对患者淋巴细胞亚群数量进行精准定量检测，是评估机体免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤诊断与治疗，及免疫功能状态的重要工具[7]。通过分析外周淋巴细胞亚群的占比，可以间接了解肿瘤局部的免疫微环境[8]特征。

此研究主要是利用流式细胞术检测TC组、BC组和NPC组这三种肿瘤患者的外周血淋巴细胞亚群，同时与非肿瘤人群（NC）进行比较，比较三者之间的淋巴细胞亚群的特征差异，以期能为探索三种恶性肿瘤免疫机制及开发个体化免疫监测方案提供数据支持。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究收集2025年6月至2025年11月期间于本院就诊的患者资料。本研究共纳入对照组71例及观察组338例。TC组、NPC组、NC组在年龄、性别等基本资料之间无明显差异（P>0.05），具有可比性，BC组性别均为女性。观察组根据疾病类型分为三个亚组：TC组94例、BC组126例、NPC组118例。NC组样本根据来源及检测平台的不同分为两部分：其中 12例来自本院，59例来自柳州市人民医院。

1.2  检测方法与仪器   

1.2.1所有受试者于清晨空腹状态下，采集外周静脉血。血液标本经抗凝处理后，采用流式细胞仪及配套试剂分析。主要检测的免疫细胞亚群及其表面标志物包括：NK细胞，表型为CD16⁺CD56⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、CD19⁺，并计算CD4⁺/CD8⁺T细胞比值。

1.2.2 仪器  BioCyte-B5R3V7 型流式细胞仪及原配套试剂  美国BD公司生产的FACSCanto II 型流式细胞仪及原配套试剂  每台仪器每天均做室内质控，并参加广西临检中心的室间质评结果合格。

1.2.3样本检测 本院样本338例采用 BioCyte-B5R3V7 型流式细胞仪进行检测分析，其中观察组：TC组94例、BC组126例、NPC组118例，对照组12例。柳州市人民医院样本59例对照组样本采用美国BD公司生产的FACSCanto II 型流式细胞仪进行检测。

1.2.4 为确保使用两个平台检测得到的数据间的可比性与分析的可靠性，我们采取了以下措施：

 a仪器校准与标准化：两台仪器每天均在检测前严格按照仪器的SOP文件进行日常质控，每年进行一次校准，通过荧光强度校准微球将不同仪器的检测通道统一至相对荧光强度单位，同时用实际细胞进行两台仪器的比对，主要是CD3+T细胞、CD56+NK细胞、、CD4⁺/CD8⁺、CD19+B细胞使得仪器之间的差异在控，CV值在（2-3）%。

b样本处理标准化：所有样本均遵循统一的前处理流程，包括采样、统一使用EDTA-K2抗凝、采血后（18-25）。C保存，采集后6-8小时内完成染色固定，标记抗体的操作步骤、孵育时间和温度，均按照SOP文件标准化操作规程进行。

C 数据分析标准化：所有流式数据采用统预先制定的的设门方案，同时依据同批次实验设定的统一荧光阈值进行阳性判定。

1.3 统计学分析

采用SPSS 25.0软件进行数据处理。计量资料以均值±标准差（x±s）表示。多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA），组间两两比较采用t检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2. 结果

2.1 各组免疫细胞比例总体比较

四组研究对象的各项免疫指标检测结果如表1所示。方差分析显示，各组在CD16+CD56+、CD3+CD4+、CD4/CD8、CD3+CD8+指标上均存在显著（P<0.05），而CD19+比例组间差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 各肿瘤免疫特征的组间差异分析

2.2.1  NK细胞（CD16+CD56+）：NPC组的NK细胞比例最高，与TC组和BC组相比显著升高（P<0.05），而与NC组无显著差异，提示细胞免疫应答较强，TC组和BC组的NK细胞比例均显著低于NC组（P<0.05）。

2.2.2  辅助T细胞（CD3+CD4+）与CD4/CD8比值： BC组的CD3+CD4+比例和CD4/CD8比值均为所有肿瘤组中最高。NPC组的辅助T细胞（CD3+CD4+）比例和CD4/CD8比值均显著低于其他两组及NC组（P<0.05），表现出明显的免疫失衡。

2.2.3  细胞毒性T细胞（CD3+CD8+）： NPC组的CD3+CD8+细胞比例显著高于TC组、BC组和NC组（P<0.05）。TC组和BC组与NC组相比无显著差异。

2.2.4  B细胞（CD19+）： 各组间B细胞比例无显著差异（P>0.05）

2.2.5  CD3+CD8+T细胞与CD4/CD8比值的中位数、25%位数和75%位数值见表2

3. 讨论

本研究通过系统的流式细胞分析，揭示了甲状腺恶性肿瘤、乳腺恶性肿瘤、鼻咽恶性肿瘤三种常见恶性肿瘤具有截然不同的外周血免疫细胞特征，反映了其肿瘤微环境的异质性。

由表1可以看出NPC的免疫学特征：NPC的CD3+CD8+范围为28.66±10.65与NC组的范围20.95±7.65相比，差异显著（P<0.05），呈现出高水平的CD8+ T细胞，此时四组CD4/CD8的中位数，NPC组是1.03为四组中位数的最低值；NPC组CD3+CD8+的中位数是26.88，是四组中位数的最高值，体现了典型的免疫失调特征，这与鼻咽恶性肿瘤的病因学有着密切关系[9]。目前认为，鼻咽癌与EB病毒存在着正相关关系，其发生与EB病毒（Epstein-Barr virus）的持续感染密切相关[10]。 EB病毒通过呼吸道传播，在患者的口咽部上皮细胞中进行增殖后释放，对淋巴组织中的B细胞进行感染，并介导自身免疫产生抗体，同时作为一种强烈的抗原刺激，也会持续激活并扩增病毒特异性的CD8+ T细胞，导致其在外周血和肿瘤组织中比例升高，对骨髓造血微循环进行破坏，进而影响免疫功能。在慢性感染或持续性抗原长期刺激下，这激活和扩增的过程反复和长期的作用导致CD8+ T细胞在数量上持续增加，如果调控失常可能会错误的攻击自身的正常组织（也就是所谓的细胞毒性活性）从而引发疾病。CD4/CD8比值出现倒置现象，这也是慢性病毒抗原驱动免疫反应的系统性体现。

其次，BC组的淋巴细胞亚群特征是CD3+CD4+T细胞比例比较高，CD4/CD8比值相对正常。CD3+CD4+ T是具有辅助效应的细胞，不能直接杀伤病原体，而是通过释放细胞因子来激活和调节其他免疫细胞。BC组的CD3+CD4+T细胞比例较高，说明BC组的免疫系统中仍旧能维持较强的辅助性T细胞应答。CD3+CD4+ T细胞在抗肿瘤免疫中起着核心作用，不仅能激活巨噬细胞使其吞噬和杀灭病原体的能力增强，帮助CD3+CD8+ T细胞的活化和记忆形成，其中的Th1亚群还能直接发挥抗肿瘤效应[11]。这个特征可能与某些乳腺癌亚型（如三阴性乳腺癌）对免疫检查点抑制剂表现出较好疗效有关。因此对于乳腺癌患者的的免疫治疗策略我们的侧重点应该是：进一步增强和维持CD3+CD4+T细胞的功能 。

再者，TC组患者的淋巴细胞亚群特征的表现是NK细胞比例的明显降低。NK细胞是天然免疫的核心淋巴细胞，在肿瘤免疫监视的第一道防线中起关键作用。甲状腺恶性肿瘤通常进展缓慢，这可能与免疫原性相对较弱有关。免疫原性越强，机体产生的反应也越激烈，主要还是体现在CD3+CD8+ T细胞的持续升高。而TC组患者的因免疫原性弱，导致CD3+CD8+ T细胞没有呈现出升高的现象。TC组患者NK细胞比例降低，也可能意味着机体对甲状腺恶性肿瘤的天然免疫监视能力失效或者减弱，以至于没办法直接对肿瘤细胞发生攻击，这或许是肿瘤得以发生和持续存在的因素之一。此外，甲状腺癌微环境中的T细胞、B细胞、树突状细胞、吞噬细胞等及其他免疫抑制因素也可能抑制了NK细胞的生成或促进其凋亡，所以使得TC组患者NK细胞比例降低。

在本研究发现，TC组、BC组这两组的CD19+（B细胞）没有表现出特别的差异。CD19的检测在多种疾病的诊断中具有重要价值特别是在淋巴瘤、多发性骨髓瘤等B细胞恶性肿瘤中，CD19的表达水平也常作为疾病监测和预后评估的指标。

NC组（主要为炎症或良性疾病患者）的淋巴细胞亚的比例有一定程度的波动，但是仍在参考范围内。这提示了我们在未来研究方向，应积极推进以下几个方面的工作：一是建立大样本人群的、涵盖健康个体与各种疾病状态的免疫细胞参考区间，为精准判别肿瘤特异性免疫改变提供基线；二是纵向追踪患者治疗前后及疾病进展过程中的淋巴细胞亚群的水平状况，评估特定免疫特征（如鼻咽癌的高NK细胞状态）作为疗效预测或预后生物标志物的潜在价值。

经过三种肿瘤组与对照组之间以及各肿瘤组之间的比较，可以看出不同的肿瘤疾病呈现出不同的规律性的差异，证实了不同类型肿瘤各自拥有独特的系统性淋巴细胞亚群特征。这些独特的免疫特征为不同肿瘤的免疫生物学行为提供了重要线索，也为疾病监测和预后评估指引了方向。

  参考文献

[1] 赵华,魏枫,任秀宝.肿瘤免疫微环境评价在疗效预测中的研究进展[J].中国肿瘤临,2018,45(12):599-603.

[2] 韩忠丽,李凯.肿瘤微环境免疫细胞在胆管癌发生发展中作用的研究进展[J].内蒙古医科大学学报,2025,47(1):84-88,92.

[3] 王倩荣.肿瘤微环境与肿瘤转移[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2011,18(5):569-573.

[4] 黄昱.乳腺癌免疫检查点抑制剂治疗进展[J].中国肿瘤临床与康复,2023,30(6):340-344.

[5] 冷晓玲.乳腺癌超声造影特征与恶性基质化、肿瘤血管异质性区域性特点的相关性[D].新疆医科大学,2015.

[6] 马云龙.原发性肝癌肿瘤微环境及肿瘤异质性的多维度探究[D].山东大学,2023.

[7] 吴婧文.早期宫颈癌患者循环和局部肿瘤微环境中免疫T细胞亚群的不同分布及其临床意义[D].复旦大学,2014.

[8] 黄雄超.鼻咽癌放疗后放射性鼻窦炎的研究进展[J].微创医学,2015,10(2):195-197.

[9] 李霞,陈晓平,张玉,鲁丹.鼻咽癌与EB病毒相关性研究[J].国际耳鼻咽喉头颈外科杂志,2018,42(1):12-15.

[10]王淑敏.新型免疫检查点LAIR1联合PD--1单抗提高CD8+T细胞抗肿瘤效果的研究[D].郑州大学,2023.

作者简介：鄢学究，女，柳州，本科，主管技师，致力于肿瘤免疫微环境与个体化治疗策略的临床转化研究，推动免疫治疗方案的精准化与个体化。13907724854，广西科技大学第二附属医院检验科545006