葡萄和土壤中吡唑醚菌酯的高效液相色谱残留分析方法

摘要：检测果蔬药品残留物方法通常选用液相色谱法，本实验需要测定葡萄和土壤中吡唑醚茵酯残留量。实验选取二氯甲烷作为提取溶剂，使用高效液相色谱检测仪，C18色谱柱，检测器波长为277nm，流动相为乙腈和水。通过实验测定吡唑醚菌酯的最低检测量、最低检测浓度为以及相关系数数值，葡萄和土壤加入标准物质之后回收率分别为80.3％～94.2％、81.7％～98.3％，相对标准偏差（RSD）分别为1.7％～3.7％、2.5％～3.1％。随着国家对于果蔬产品农药使用量严格规范，对于药品含量精准检测有利于提供健康食品，根据此方法具有线性表现较好、简捷、快速、精确的优点，通常用于检测葡萄及土壤中吡唑醚茵酯残留量。

关键词：吡唑醚菌酯；葡萄；土壤；液相色谱法；残留分析

吡唑醚菌酯属于一种新型广谱杀菌剂。溶解性：水中0.00019(20oC，g/100 mL)，能溶于酮、酯、醇、芳烃等普通有机溶剂；采用吡唑醚菌酯的优点在于杀菌能力较强、活性好、与环境生物亲和性高等，能较好预防与治理农作物多种真菌侵害，主要杀菌原理是通过抑制细菌呼吸作用杀死细胞，可作为葡萄预防与治疗葡萄霜霉病的制剂。主要针对吡唑醚菌酯在果蔬中的残留检测方式存在很多相关报道，大部分以甲醇和水进行提炼，硅胶净化检测。我国目前对吡唑醚菌酯残留检测还在探索阶段。本文分析了吡唑醚菌酯在葡萄和土壤中残留量检测的样预处理、高效液相色谱检测状况，为吡唑醚菌酯在葡萄上科学运用、制定相关农业药剂使用规范提供数据支持。此外，相关单位还需要对相关技术进一步分析研究，不断改善实验方案，提升实验检测方法精确度，从而为我国残留检测技术方法发展提供有效助力，为在葡萄种植施加相关杀菌剂提供有价值参考信息。

1材料和方法

1.1仪器和试剂

LC-20AT液相色谱仪；超声波清洗仪；组织捣碎机；紫外检测器；工作站；电子天平；旋转蒸发仪；250mL碘瓶等玻璃仪器；重蒸水；甲醇、乙腈（色谱纯）；二氯甲烷、无水硫酸钠（A.R.)；吡唑醚菌酯标准品（≥98.0％)；葡萄、挖取未施加吡唑醚菌酯葡萄种植园的土壤。

1.2色谱条件

色谱柱：VP—ODS C18柱，250mmx4.6mm不锈钢柱；流动相：乙腈：水=65：35(V／V)；流速：0.7mL/min；紫外最大吸收波长：277nm；进样量：20；柱温：25oC。

1.3标准溶液的配制

称取吡唑醚菌酯标准品大约0.1g（准确至0.0001g）于100mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容，摇晃均匀，配出1 g/L标准储备溶液，在零下18℃下冷藏留存（三个月内有效）。检测中按照要求用甲醇将标准储备溶液，加水调节成所需浓度的标准溶液。

1.4样品的提炼和过滤

称取制备的样品25g于300mL碘瓶中，分4次加80、80、60、60mL二氯甲烷，超声波处理16min，将提取液在无水硫酸钠中净化，然后倒入反应器中，用旋转蒸发器（30oC）降压蒸发至接近干涸状态。用甲醇制备10mL溶剂，流入SPEC18柱，预备检测时使用。

1.5计算

2结果和讨论

2.1萃取溶剂的选择

根据有关资料前处理是以甲醇和水提取、硅胶净化，在全面考虑检测简捷性、提取过程和过滤效果的因素下，该实验分别选取二氯甲烷、丙酮：水=8：2(W)、乙酸乙酯：石油醚=2：1(V／V)对吡唑醚菌酯进行了提炼对比。将含有吡唑醚菌酯的样品，分别用二氯甲烷、丙酮／水、乙酸乙酯／石油醚超声提炼16min，同时检测4份。实验显示，提取率均值二氯甲烷95.3％，丙酮／水82.2％，乙酸乙酯／石油醚80.6％.且二氯甲烷析出的杂质不多，因此将二氯甲烷作为萃取溶剂。

2.2液相色谱条件

对吡唑醚菌酯的分离，本试验对CN色谱柱和C18色谱（进行了比较。选用CN色谱柱(300mmx4.7mm)，流动相为正庚烷：四氢呋喃=92：8(V／V)，0.8mL/min，峰形尖锐，但葡萄样品杂质峰与吡唑醚菌酯峰部分重叠。选用C18色谱柱(250mmx4.6mm)，流动相为甲醇：水=80：20(V／V)，0.7mL/min，峰形不理想，互相不对称；流动相为乙腈：水=65：35(v／v)，0.7mL/min，峰形尖锐，同时葡萄和土壤样品中的吡唑醚菌酯峰与杂质峰完全分离，因此选用C18。色谱柱，流动相为乙腈：水=65：35(V／V)，0.7mL/min。

2.3线性范围和检测限

采用甲醇配制溶剂，制备所需检测物质标准，设置不同浓度分别为0.01、0.02、0.1、0.2、1、2、5g/mL，各进样10。检测实验显示，液相色谱峰面积Y与吡唑醚菌酯浓度X呈线性正相关（p<0.001)，其校准曲线方程为Y=5953.6X-9406.5，相关系数为0.9985。

在以上实验条件下，当溶液中所需检测物质浓度下降为0.01g／mL，峰形讯噪比>3，表1为具体实验数据，峰形讯噪比>3。由此可知，最小检测浓度为0.01mg/kg。对于吡唑醚菌酯在葡萄中最大残留检测限值，相关单位未明确规定，而是指出吡唑醚菌酯在葡萄中最高残留限量为2.0mg/kg，该实验数据在此规定数值内。

2.4方法的回收率和精密度

选取空白量的葡萄和土壤，分别加入0.01、1、2mg/kg的吡唑醚菌酯，每个添加同时检测5次，计算实验数据（表1，图1～6)。由表1数据可知，样品中的加入含量为0.01、1.0、2mg／kg，葡萄和土壤中的加入标准溶液回收率分别为80.3％～94.2％、81.7％～98.3％，变异系数为1.7％～3.7％、2.5％～3.1％。实验数据说明，检测的精确度、还原性能够用于吡唑醚菌酯残留量测定。

表1空白葡萄、土壤添加吡唑醚菌酯的回收率和精密度

图1 吡唑醚菌酯标样色谱图            图2 葡萄空白样品色谱图

图3 葡萄添加吡唑醚菌酯标样色谱图      图4 吡唑醚菌酯标样色谱图

图5 土壤空白色谱图             图6 土壤添加吡唑醚菌酯标样色谱图

2.5讨论

本实验使用LC-20AT液相色谱仪，通过设置实验，选用在葡萄和土壤中提取吡唑醚菌酯方法、测定方式。考虑到吡唑醚菌酯电解性质较为明显，对葡萄中吡唑醚菌酯的提炼，通过对比丙酮、二氯甲烷、乙腈性质，选取适当提取溶剂。其中丙酮几乎不具毒性，但提取出杂质较多，二氯甲烷与乙腈毒性均较低，但从具体提取实验的平均提取率观察，二氯甲烷效果好于乙腈，故最终选取二氯甲烷，而且二氯甲烷在常温条件比其他同类物质稳定，不会发生为聚合反应，具有较好的溶解性，能够使土壤中吡唑醚菌酯更充分地溶于二氯甲烷中，将溶于水的其余干扰杂质去除，以便于进行后续步骤的过滤。对试样的净化，本实验选用CN色谱柱和C18色谱柱对比。通过实验对比可知，CN色谱柱净化后峰形尖锐，但是所需检测物质的峰面积显著减小，这可能是因为CN固相萃取柱内具有了直径较大的细小颗粒，可影响降低杂质物及检测物的响应值，因此，本实验选择C18色谱柱，该柱葡萄样品中吡唑醚菌酯具有有效净化作用，回收率充分符合吡唑醚菌酯残留量测定的要求。

实验结果显示，当进样溶液浓度为0.01g/mI时，吡唑醚菌酯峰面积与标准品溶液浓度线性关系良好，校准曲线方程为Y=5953.6X-9406.5。吡唑醚菌酯在葡萄和土壤中加入标准物质之后回收率分别为80.3％～94.2％，相对标准偏差为1.7～3.7；在土壤中的加入标准物质之后回收率为81.7％～98.3％，相对标准偏差为2.5～3.1，符合残留测定要求。在设置的实验情况下，样品的最小检测量为2x10-10g，最小检测浓度为0.01mg/kg，在相关要求吡唑醚菌酯在葡萄中的最小允许残留限量为0.01mg/kg。实验结果表明，使用高效液相色谱法对葡萄和土壤中残留的吡唑醚菌酯进行测定方式具有可行性，可在相关检测部门进行推广使用，并不断完善检测样本信息提出更加详细的实验参照。

结论

综上所述，本文通过葡萄和土壤中吡唑醚菌酯残留检测方法，具有优点包括前处理简捷、精密性和准确度、线性阈值、添加回收率等方面都符合实验需求，不同情况的添加回收率变化不大，此方法的检测值限度低，能够精确、快捷地检测葡萄及土壤中吡唑醚菌酯的残留量，能够保证检测葡萄中残留药品的效果，为今后相关实验提供有效参考，进一步完善高效液相色谱检测方法。

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