蒙药嘎日迪-5有效成分的提取工艺优化研究

摘要：目的：建立嘎日迪-5多种成分同时定量分析的HPLC法，并对其提取工艺进行优化。方法：采用Accucore RP-MS C18色谱柱（150 mm×2.1 mm，2.6 μm），乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，检测波长为245 nm，建立多种成分的含量测定方法。以层次分析法获得的综合评分为评价指标，进行Box-Behnken设计-响应面试验，并对得到的最优提取工艺进行验证。结果：建立了嘎日迪-5中6种成分的HPLC含量测定方法和以综合评分为评价指标，通过Box-Behnken设计-响应面优化法。嘎日迪-5最佳提取工艺为溶剂配比为乙醇：水=60：40、料液比为嘎日迪-5 /溶剂=3/20g/ml和超声提取时间为50min 。结论：建立的含量测定方法准确可靠，为该制剂质量控制和药效物质基础研究提供参考。优化的提取工艺合理可行，为嘎日迪-5生产提供支持。

关键词：嘎日迪-5；高效液相色谱法；含量测定；提取工艺；层次分析法；Box-Behnken响应面法

嘎日迪-5是蒙古传统医学中临床用药中常用的一种复方药物，由诃子、制草乌、木香、石菖蒲、麝香组成，主要用于减缓关节肌肉的疼痛，缓解炎症反应，治疗风湿性关节炎，主要用于治疗风湿性关节炎等情况的疾病。共同构成了麝香独特的化学组成，对麝香所展现出的功效与特性有着关键作用。蒙药作为我国传统医学的重要组成部分，具有独特的疗效和价值。嘎日迪-5 是一种常用的蒙药方剂，在临床应用中显示出良好的治疗效果。嘎日迪-5现有的研究有对其化学成分的研究，提高药物质量：优化提取工艺可以提高嘎日迪-5 中有效成分的含量，从而提高药物的质量和疗效。推动蒙药现代化：为蒙药的现代化研究和开发提供技术支持，促进蒙药产业的发展。丰富传统医学研究：有助于深入了解蒙药的药理作用和作用机制，丰富传统医学的研究内容。对蒙药嘎日迪-5有效成分的提取工艺进行系统研究和优化。结合现代分析技术，对有效成分进行分析与鉴定，为蒙药的质量控制提供新方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1200 HPLC–UV(安捷伦科技公司)；KQ-250E超声波清洗机(昆山超声波仪器有限公司)；FA2104电子分析天平(上海京海仪器有限公司)；手提式中药粉碎机（浙江省温岭市创力药材器械厂）。

1.2药物与试剂 

对照品：苯甲酰新乌头原碱（批号 DST240123-056）、去氢木香烃内酯（批号 DST240105-042）、β-细辛醚（批号DSTDA001901）、木香烃内酯（批号231101）、 鞣花酸（批号2024051432 ）、胡椒碱（批号 2024060543），购买于成都德思特生物技术有限公司。乙腈、甲醇，色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；水为超纯水（自制）。

1.3丸剂与药物

嘎日迪-5：（内蒙古库伦蒙药有限公司，191245），制草乌、诃子、水菖蒲、木香：（内蒙古赤峰市阿鲁科尔沁旗医院）。

2 方法与结果

2.1 蒙药嘎日迪-5多种成分含量测定 

2.1.1 色谱条件

色谱柱为Accucore RP-MS C18柱 （150 mm×2.1 mm，2.6 μm）； 乙腈-0.2% 磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱见表2.1； 检测波长见表2.2；柱温 30 ℃；实验室温度27 ℃；进样量20 μL。

表2.1  梯度洗脱

表2.2  检测波长

2.1.2 对照品溶液的制备

在制备对照品溶液时，首先依据“2.2”项下的要求，分别准确称取适量的各对照品。然后逐一放置于对应的量瓶中，然后以甲醇为溶剂，溶解，定容至刻度，当作对照品储备液。

精密量取以上各对照品储备液适量，再逐个移动到5mL量瓶中。放入甲醇定容，充分摇匀混合后，制成混合对照品溶液，以便后面实验分析的时候参考使用。其中6种对照品的质量浓度分别为苯甲酰新乌头原碱1.02mg/mL、去氢木香烃内酯0.82mg/mL、β-细辛醚2.0mg/mL、木香烃内酯0.94mg/mL、 鞣花酸1.02mg/mL、胡椒碱1.1mg/mL。

2.1.3 供试品溶液的制取流程

取蒙药嘎日迪-5精确称取3.00g粉碎后的样品至50ml的锥形瓶中。向瓶内加入60%甲醇水溶液，使样品充分溶解后，定容至刻度线。随后，将锥形瓶置于超声仪中，超声提取40分钟。提取结束后，先采用滤纸过滤，再使用0.45μm微孔滤膜进一步过滤，收集续滤液，制得浓度为0.15g/mL的供试品溶液。

2.1.4 阴性对照样品溶液的制备过程

分别制备缺少制草乌、诃子、木香、水菖蒲的阴性对照样品。参照“2.1.4”的操作步骤，依次制备各个阴性对照品溶液。

2.2 蒙药嘎日迪-5制备工艺优化

（1）试验设计与结果：按照单因素实验结果，选不同因素适宜的水平范围，运用Design-Expert-13 软件，以综合评分为响应值，以溶剂配比（A）,令1为乙醇：水=70：30，2为乙醇：水=60：40，3为乙醇：水=50：50、料液比（B)（g/ml）和超声提取时间（C）min为影响因素，进行3因素3水平BBD响应面试验，BBD响应面试验设计与结果见表2.1，6种成分测定结果见表2.1。

表2.1   Box-Behnken响应面试验设计与结果

最优工艺的确定及验证：根据BBD试验 生成的模型进行预测，得出最优提取工艺为溶剂配比（X1）=2、料液比=3/20ml/g和超声提取时间=50min，在此条件下可得综合评分为143分。为了评价这一方法的稳定性和重复性，通过平行3次试验测定6种成分的含量， 结果见表2.2，3批样品综合评分均值是146分， 接近并略大于BBD模型预测值，RSD为1.01%，这显示了最优制备工艺相对稳定，可行合理。

表2。2 工艺验证结果

3 讨论 

3.1 色谱条件

在实验进行了全波长扫描以后，谱图信息最为全面的结果在254nm波长处。流动相的选择中考察了甲 醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.2%磷酸—水溶液等的洗脱效果，结果乙腈-0.2%磷酸—水溶液的洗脱能力效果比其他要好，而且基线比较平稳。通过进一步的调整流动相比例和时间，最终确定项下最佳色谱条件。

3.2提取工艺考察

基于蒙药嘎日迪-5消炎止痛的功效，本研究通过查文献将获取的6种主要有效成分。其中分别归属于诃子的鞣花酸；制草乌的苯甲酰新乌头原碱；水菖蒲的胡椒碱和β-细辛醚；木香的木香烃内酯和去氢木香内酯。此外，文献研究还表明诃子的鞣花酸；制草乌的苯甲酰新乌头原碱；水菖蒲的胡椒碱和β-细辛醚；木香的木香烃内酯和去氢木香内酯成分具有治疗红肿热痛、 抗菌抗炎、皮肤溃烂等药理效果。所以，这一实验把以上6种活性成分当作含量测定的指标，是有一定的代表性与科学性的。

4 结论

后续研究可在此基础上，进一步拓展研究范围，深入探索蒙药嘎日迪-5有效成分提取工艺展开优化，通过响应面法，系统考察了溶剂配比、料液比、超声提取时间对蒙药嘎日迪-5提取率的影响。结果表明，在优化条件溶剂配比为乙醇：水=60：40、料液比=3/20g/ml和超声提取时间=50min显著提升了有效成分的提取效率。

对蒙药有效成分提取工艺的优化研究，不仅为蒙药嘎日迪-5的工业化生产提供了科学、高效的技术方案，提高了资源利用率，降低生产成本；而且有助于提升蒙药质量的稳定性和可控性，为蒙药现代化、标准化发展奠定了坚实基础，进一步推动蒙药在医药领域发挥独特优势，服务更多患者。

本研究仍存在一定局限性，仅考察了溶剂配比、料液比、超声提取时间,研究中未涉及的因素还有其他潜在的影响因素、不同产地药材差异等，未来研究方向如研究不同产地药材对提取工艺的影响、开发新的提取技术等，以期不断完善蒙药有效成分提取工艺，挖掘蒙药更大的药用价值。

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