不同抗凝剂比例对全自动凝血分析仪检测凝血四项结果的影响及性能验证

摘要：目的：分析不同抗凝剂（枸橼酸钠）与血浆比例对全自动凝血分析仪检测凝血四项结果的影响，并验证仪器在标准抗凝比例下的检测性能。方法：选取2024年3月在本院体检中心接受健康体检的80例健康受试者，采集静脉血后分别按照抗凝剂与血浆体积比1:8、1:9（标准比例）、1:10进行分组处理，使用SysmexCS-5100全自动凝血分析仪检测各组凝血四项指标。同时，采用标准品对仪器进行精密度、准确度验证，计算批内CV、批间CV及相对偏差。结果：与标准比例（1:9）组相比，1:8组的PT、APTT、TT水平显著缩短（P<0.05），FIB水平显著升高（P<0.05）；1:10组的PT、APTT、TT水平显著延长（P<0.05），FIB水平显著降低（P<0.05）。仪器性能验证结果显示，PT、APTT、TT、FIB的批内CV分别为1.25%、1.58%、1.32%、1.10%，批间CV分别为1.86%、2.15%、1.98%、1.52%，相对偏差均在±3.0%范围内。结论：抗凝剂与血浆比例偏离1:9标准会显著影响凝血四项检测结果，临床检测中需严格控制抗凝比例；SysmexCS-5100全自动凝血分析仪在标准抗凝条件下的精密度和准确度符合临床要求，可用于常规凝血功能检测。

关键词：抗凝剂比例；全自动凝血分析仪；凝血四项；性能验证；检测结果

凝血功能检测是临床评估患者止血与凝血状态的重要手段，其中凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）及纤维蛋白原（FIB）组成的凝血四项是诊断出血性疾病、监测抗凝治疗效果及评估手术出血风险的核心指标[1]。全自动凝血分析仪凭借检测速度快、结果重复性好等优势，已成为临床实验室凝血功能检测的主要设备，但检测结果易受多种因素影响，其中抗凝剂比例是关键影响因素之一[2]。目前临床常用的抗凝剂为3.2%枸橼酸钠，标准抗凝比例为抗凝剂与血浆体积比1:9，该比例的设定基于全血中红细胞压积（Hct）在正常范围时，血浆占全血体积的50%左右，可确保抗凝剂浓度能有效抑制凝血因子活性[3]。然而，在实际操作中，由于采血技术不当、患者Hct异常（如贫血或脱水导致Hct过低或过高）等因素，易导致抗凝剂与血浆比例偏离标准，进而影响检测结果的准确性[4]。此外，全自动凝血分析仪的检测性能需通过定期验证，才能确保其在临床应用中的可靠性[5]。本研究以健康受试者为研究对象，通过设置不同抗凝剂与血浆比例，分析其对凝血四项检测结果的影响，并对全自动凝血分析仪的性能进行验证，旨在为临床规范凝血功能检测操作、提高检测结果准确性提供参考依据。

1一般资料与方法

1.1一般资料

选取2024年3月在本院体检中心接受健康体检的80例健康受试者，其中男性42例，女性38例；年龄22-55岁，平均年龄（36.85±8.24）岁。纳入标准：（1）无出血或血栓性疾病史；（2）近1个月内未服用抗凝药物（如华法林、阿司匹林等）；（3）血常规检查中红细胞压积（Hct）在35.00%-50.00%范围内；（4）肝肾功能指标正常。排除标准：（1）存在血液系统疾病、肝脏疾病、肾脏疾病者；（2）妊娠期或哺乳期女性；（3）近期有手术史或创伤史者。

1.2仪器与试剂

仪器：SysmexCS-5100全自动凝血分析仪（日本Sysmex公司），仪器经计量部门校准合格，处于正常工作状态。试剂：PT检测试剂盒（批号：20240115）、APTT检测试剂盒（批号：20240120）、TT检测试剂盒（批号：20240118）、FIB检测试剂盒（批号：20240122）均购自日本Sysmex公司，所有试剂均在有效期内，按说明书要求储存和使用。标准品：凝血功能标准品（批号：SRM-969c，美国NIST公司），用于仪器准确度验证。抗凝管：含3.2%枸橼酸钠的真空抗凝管（规格：3mL，抗凝剂体积0.3mL，批号：20240105，江苏康健医疗用品有限公司）。

1.3方法

1.3.1样本采集与分组

采集所有受试者空腹静脉血，严格按照无菌操作规范进行，使用含3.2%枸橼酸钠的真空抗凝管，分别按照以下3种抗凝剂与血浆比例进行处理：1:8组：采集全血2.4mL（抗凝剂0.3mL+全血2.1mL），离心后血浆体积约1.05mL，抗凝剂与血浆体积比为1:8；1:9组（标准比例组）：采集全血2.7mL（抗凝剂0.3mL+全血2.4mL），离心后血浆体积约1.2mL，抗凝剂与血浆体积比为1:9；1:10组：采集全血3.0mL（抗凝剂0.3mL+全血2.7mL），离心后血浆体积约1.35mL，抗凝剂与血浆体积比为1:10。所有样本采集后30min内以3000r/min离心15min，分离血浆，避免溶血、脂血或黄疸，于2h内完成凝血四项检测

1.3.2凝血四项检测

按照SysmexCS-5100全自动凝血分析仪操作说明书进行检测：PT检测：采用凝固法，检测原理为组织因子激活外源性凝血途径，记录血浆凝固时间；APTT检测：采用凝固法，检测原理为白陶土激活内源性凝血途径，记录血浆凝固时间；TT检测：采用凝固法，检测原理为thrombin直接作用于纤维蛋白原，记录纤维蛋白形成时间；FIB检测：采用凝固法，基于PT检测原理，通过标准曲线计算FIB浓度。

1.3.3仪器性能验证

精密度验证：选取高、中、低3个浓度水平的凝血四项质控品（批号：20240201，罗氏诊断公司），每个浓度水平连续检测10次，计算批内CV；每天检测1次，连续检测10d，计算批间CV。CV<3.0%为精密度合格。准确度验证：使用凝血功能标准品（SRM-969c），按照说明书要求稀释后，检测凝血四项指标，计算相对偏差（相对偏差=（实测值-标准值）/标准值×100%）。相对偏差在±3.0%范围内为准确度合格。

1.4统计学方法

采用SPSS26.0统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差（x̄±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA），两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1不同抗凝剂比例对凝血四项检测结果的影响

80例健康受试者在不同抗凝剂比例下的凝血四项检测结果见表1。与标准比例（1:9）组相比，1:8组的PT、APTT、TT水平显著缩短（P<0.05），FIB水平显著升高（P<0.05）；1:10组的PT、APTT、TT水平显著延长（P<0.05），FIB水平显著降低（P<0.05）。

表1不同抗凝剂比例下凝血四项检测结果比较（x̄±s，n=80）

2.2全自动凝血分析仪精密度验证结果

仪器精密度验证结果见表2。PT、APTT、TT、FIB的高、中、低3个浓度水平批内CV均<2.0%，批间CV均<2.5%，均符合CV<3.0%的合格标准。

表2全自动凝血分析仪精密度验证结果（CV%，n=10）

2.3全自动凝血分析仪准确度验证结果

仪器准确度验证结果见表3。PT、APTT、TT、FIB的实测值与标准值的相对偏差均在±2.5%范围内，符合相对偏差<±3.0%的合格标准。

表3全自动凝血分析仪准确度验证结果（相对偏差%）

3讨论

凝血四项检测结果的准确性直接关系到临床诊断与治疗决策，而抗凝剂比例是影响检测结果的关键因素之一[6]。本研究结果显示，抗凝剂与血浆比例偏离1:9标准时，凝血四项指标会发生显著变化，这与以往研究结论一致[7]。当抗凝剂比例过高（1:8组）时，即血浆量相对不足，抗凝剂浓度升高，会加速凝血因子的抑制过程，导致PT、APTT、TT缩短；同时，过高的抗凝剂浓度可能干扰FIB的检测反应，使FIB检测结果偏高[8]。反之，当抗凝剂比例过低（1:10组）时，即血浆量相对过多，抗凝剂浓度降低，无法充分抑制凝血因子活性，导致凝血反应提前启动，PT、APTT、TT延长；而FIB作为凝血反应的底物，其检测结果会因抗凝不足导致的部分凝血而偏低[9]。

从临床应用角度来看，这种因抗凝比例不当导致的结果偏差可能引发误诊或误治。如1:8组的PT缩短可能被误判为患者处于高凝状态，而1:10组的PT延长可能被误判为抗凝治疗过量或凝血因子缺乏，进而影响临床对血栓或出血风险的评估[10]。因此，临床实验室在进行凝血功能检测时，需严格控制抗凝剂比例：一方面，应规范采血操作，确保采血量准确；另一方面，对于Hct异常的患者，需根据公式调整抗凝剂体积，以保证抗凝剂与血浆比例符合标准。本研究同时对SysmexCS-5100全自动凝血分析仪的性能进行了验证，结果显示该仪器的批内CV、批间CV均<3.0%，相对偏差均在±3.0%范围内，表明其精密度和准确度均符合临床检测要求。精密度良好意味着仪器在重复检测时结果稳定性高，可减少随机误差对检测结果的影响；准确度良好则意味着仪器检测结果与真实值接近，可减少系统误差对检测结果的影响。此外，该仪器采用凝固法检测凝血四项，检测原理成熟，与临床常用的检测方法一致性高，进一步确保了检测结果的可靠性。

综上所述，抗凝剂与血浆比例偏离1:9标准会显著影响凝血四项检测结果，临床检测中需严格规范抗凝操作；SysmexCS-5100全自动凝血分析仪在标准抗凝条件下的检测性能良好，可满足临床常规凝血功能检测的需求。本研究的局限性在于：仅选取了Hct正常的健康受试者，未分析Hct异常患者在不同抗凝剂比例下的检测结果；且仅验证了SysmexCS-5100一种型号的全自动凝血分析仪，结果的普适性需进一步扩大样本量和仪器型号进行验证。未来研究可纳入Hct异常的患者群体，分析抗凝剂比例调整对检测结果的校正效果，并对比不同型号全自动凝血分析仪的性能差异，为临床实验室选择和使用凝血检测设备提供更全面的参考。

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