舒肝和胃颗粒对大鼠慢性浅表性胃炎LGR5和MDA的研究

【摘要】观察舒肝和胃颗粒对实验大鼠慢性浅表性胃炎LGR5和MDA的影响。方法：50只大鼠，随机分为5组：模型组、空白组、舒肝和胃颗粒大剂量组（5.0g/kg）、中剂量组（2.5g/kg）、小剂量组（1.25g/kg）。方法：采用0.02%氨水对大鼠进行慢性浅表性胃炎造模，观察舒肝和胃颗粒在实验中对慢性浅表性胃炎的治疗作用。结果：舒肝和胃颗粒可使胃黏膜组织中LGR5的表达和MDA均出现治疗效应。结论：舒肝和胃颗粒对大鼠慢性浅表性胃炎具有治疗作用。

【关键词】：舒肝和胃颗粒；LGR5；MDA；慢性浅表性胃炎

基金项目：包头市卫生健康委科技计划项目

编号：wsjkwkj004 

慢性浅表性胃炎（chronic superficial gastritis‚ CSG ）是 临床消化 系统常见多发病 在 中医 属“ 胃脘痛” 、“ 心下痞 ” 、“ 反酸 ”等病证由 于 疾 病表现为长期慢性胃部症状 消 化吸收功能紊乱 导 致对营养代谢 、植 物神经功能调节 、内 分泌激素释放水平 、生 长发育机能、以 及整体免疫机能等全身的影响 成 为继发 其它 疾 病的潜在因素 。患病人群的体质减弱、生存质 量下降， 又 是造成人们社 会心理异常的一个重要因素。我们在研究 中 采 用取得临床效果相对成熟的 “ 舒肝和胃汤 ” 中药组方，以 中药颗 粒 的 提 取 物 制 剂 形式 观 察了对大鼠实验性慢性浅表性胃 炎过程 中的 病 理 改 变 、基 因及 自由基水平的影响研究了中药 在慢性胃炎中的作用层面影响及 临床意义， 进 一步为临床治 疗提供 依据 。

1.材料和方法

1.1 材料

1.1.1 药物：采 用由包医 一 附院中医科王睿琦主任医师的经验方 舒肝 和 胃颗汤制成。方药以柴胡、鸡内金 、川 楝子 、瓦楞子、郁 金 、黄 芩等14味 中草药组成。 用 干法粉碎纯化 、浓 缩制粒和 干燥 整 粒 ，制 成口服低糖颗 粒剂 。提取药物与生药比1g 相当于生药5g 。实验设计成人用量为每日2次 每次10g 。

1.1.2 动物：试 验用 Wister 大鼠50只 雌 雄各半，平 均体重200±30g由内 蒙 古 大 学 实 验动物中 心提供。合 格证号 ：SCXK （蒙）第 2002－0001号 。

1.1.3 试 剂：氨 水，洛 阳化学试剂 厂 ，批 号：010318。LGR5试剂盒，三鹰，大鼠丙二醛（MDA）,江苏酶免

1.2 方法

1.2.1   制 备大鼠实验性慢性浅表性胃炎动物模型 。实验组取大 鼠50只 雌 雄各半 分 笼饲养。以0．02％ 氨水给大鼠自由饮 用 连 续90天诱 发大鼠 试验 性慢 性浅表性胃炎 制 备大鼠试 验性 浅 表性胃炎动物 模型 。其余14只 大鼠作为空白组，对照组 做常 规 饲养 造模结束 后 随 机抽取模型组18只 （雌 雄各半）， 空白 组 4只（雌 雄各半）断头处死取 出全 胃做常规病理切片确 认造模成 功[1]。

1.2.2 分组及给药：将50只大鼠随机分成5组（每组10只），分别为空白组、模型组、舒肝和胃颗粒大剂量组（5.0g/kg）、中剂量组（2.5g/kg）、小剂量组（1.25g/kg）。舒肝和胃颗粒按1ml/100g体重以蒸馏水配成混悬液给药，空白组和模型组给予等体积蒸馏水，每天定时灌服1次，连续给药30天，喂养同造模日。

1.2.3 病理组织学观察：大鼠胃以10%甲醛固定3日后，在胃体部及胃窦部和选择一黏膜纵向部位，石蜡包埋，5um切片，作HE染色，观察胃黏膜层炎症浸润程度。

1.2.4  LGR5的表达的测定方法：普通石蜡包埋，4um厚度切片，采用SP（免疫组化）染色方法，测定结果。按照免疫组化试剂盒要求，在Nikon偏光倒置显微镜下观察免疫阳性反应物的分布与定位。随机选取5个不重复视眼，镜下计数形态完整的lgr5阳性细胞，计算各组的平均阳性细胞数。

1.2.5 MDA含量测定：末次给药结束后，禁食水1天，对大鼠进行断头取血5毫升，2500rpm离心15min，取分离血清按MDA试剂盒操作说明测定MDA（丙二醛）的含量。

2.结果

  在实验确认动物模型达标基础上，采用舒肝和胃颗粒对实验性慢性浅表性胃炎进行治疗实验。在实验周期的各项实验指标要求统计汇总，对各项检测指标的数据均采用LSD-t统计学方法进行统计处理。根据病理组织学观察炎细胞浸润级别病变评分检测结果，表明该药能明显减轻胃黏膜的炎症程度（见表1）。对Lgr5蛋白表达水平测定结果，表明模型组与空白组存在显著差异（p<0.05）,说明Lgr5在慢性浅表性胃炎中存在着较强的基因表达水平；模型组的阳性细胞表达率大于大剂量组，两组之间有显著差异（p<0.05）,说明药物治疗对Lgr5蛋白表达水平有明显影响（见表2）；对MDA含量水平变化测定结果，表明该药能降低血清MDA含量（见表3）。

表1 舒肝和胃颗粒对实验性大鼠慢性浅表性胃炎大鼠胃黏膜炎症程度的影响（n:动物只数）

与空白组比较p<0.05   与模型组比较p<0.05

表2 舒肝和胃颗粒治疗对实验性大鼠慢性浅表性胃炎胃黏膜Lgr5阳性表达情况

因方差不齐，做多样本比较秩和检验，得出H=31.1592 p=0.0000。经样本两两比较秩和检验得出：空白组与其他各组都有差异，空白组与模型组、中剂量组和小剂量组都有统计学意义；模型组与大剂量组比较有统计学意义，与其余各组均无统计学意义。

表3舒肝和胃颗粒治疗对实验性大鼠慢性浅表性胃炎MDA的含量变化

与空白组比较p<0.05   与模型组比较p<0.05

3 讨论

慢性浅表性胃炎（CGS）是一种常见病，多发病，在胃镜检中约占全部胃炎50%-80%，在各种胃病中居首位，为当今国内外受到广泛关注的一个重要消化系统疾病。其失于治疗，极易进展为慢性萎缩性胃炎继而发生癌变。所以研究慢性浅表性胃炎治疗就显得尤为重要。慢性浅表性胃炎的病理改变不伴有胃粘膜萎缩，胃粘膜层以淋巴细胞和浆细胞为主的慢性炎细胞浸润的慢性胃炎。中医认为，本病部位虽在胃，但与肝关系密切。病因主要为情志抑郁、饮食寒热内伤胃粘膜，导致肝气不舒，胃失和降，痰淤气滞，寒热互结，胃膜受伤。病情可见胃脘疼痛、烧心反酸、心烦口苦、咽干恶心等症。治疗以舒肝和胃止痛、清热祛寒消极为法。舒肝和胃颗粒方药中柴胡、青皮、郁金舒肝理气，鸡内金、焦槟榔、瓦楞子、厚朴和胃化积，石膏，黄芪，黄莲干姜清化寒热，元胡、五灵脂理气活血止痛。合方具有舒肝理气，和胃消痞，制酸止吐，通络止痛之功效。CGS是多种诱因引起的慢性胃粘膜炎症，由攻击因子和/或防御因子失衡所致部分浅表性胃炎。

通过研究主要观察大鼠慢性浅表性胃炎组织中lgr5表达变化，从而在早期发现其与胃癌发展的相关性，起到早期发现并治疗，起到预防胃癌的进一步发展。lgr5是具有18个富含亮氨酸的重复单位和7个跨膜区域组成的大分子蛋白，是G蛋白偶联受体家族的成员之一，是wnt信号通路的一种靶基因，lgr5在人体分布广泛，在大脑，脊髓，乳腺，毛囊，眼睛，生殖器官及胃肠道都有表达。探讨长时间灌药物刺激大鼠胃组织造成炎症反应，持续炎症反应可能激活Wnt经典信号通路，而lgr5又是Wnt通道的靶基因，从而引起lgr5表达增加。再通过药物治疗观察该蛋白表达明显减少，其高表达与炎症肿瘤的发生与发展存在密切关系。MDA：近年来研究证明，氧自由基及其引发的脂质过氧化反应是休克、炎症、心力衰竭、肿瘤等发病机理的因素之一，脂质过氧化反应可使膜受体、膜蛋白酶、离子通道和膜转用系统等的脂质微环境改变及功能障碍；也可导致膜的基本特征变性、离子转运和酶的活性发生改变。此外，过量的氧自由基还可进一步引起细胞内钙超载、DNA断裂、染色体畸变、蛋白质变性以及诱导炎症介质产生。丙二醛（MDA）是脂质过氧化反应的最终产物，能较好的反应氧自由基，其含量的变化不仅可反映体内氧自由基生成与否，还可反映氧自由基造成组织损伤严重程度[2]、[3]、[4]、[5]。采用测定血清脂质过氧化物（丙二醛）的含量，反应组织过氧化损伤程度及应用舒肝和胃颗粒各组变化情况，血清MDA可反映机体氧化损伤严重程度，其水平越高表明实验性大鼠脂质过氧化程度越严重。实验中胃黏膜病理观察显示，该中药有显著的保护胃黏膜，减轻炎症反应，促进胃黏膜损伤及修复作用。通过本研究显示，说明了中药在对慢性浅表性胃炎的治疗过程中的作用，不仅仅表现在症状的缓解或消除，而在组织病理学、基因表达和氧自由基含量水平的深层次上有着明显的逆向转化作用。揭示中药在慢性浅表性胃炎中的作用及临床意义，进一步为慢性浅表性胃炎的临床检验及临床疗效判定，在医学方法上提供了依据。

参考文献：

（1）王睿琦等.舒肝和胃颗粒对大鼠实验性慢性浅表性胃炎的治疗研究.内蒙古中医药，2008,1（1）55-57

（2）Barker  N,van EsJH,Kuipers J,et al.Identification  of  stem  cells in small  intestine  and colon by  marker  gene  Lgr5. Nature ,2007 ,449(7165):1003-1007

（3）Sen M ,Lauterbach K ,EI-Gabalway H ,et  al. Expression and function of wingless  and  frizzled  homologs in rheumatoid arthritis. Proc Natl Acad  Sci U S A,2000,97(6):2791-2796

（4）Polzer K,Diarra D,Zwerina J，et  al .Inflammation and destrution of the Wnt pathway (J).Joint Bone Spine,2008,75(2):105-107

郭志雷，左 及，金惠铭. Wnt-frizzled信号通路与心血管疾病关系研究进展。中国病理生理杂志，2008,75（2）：105-107