研究慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变

【摘要】目的：研究慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变。方法：选取2024年7月-2025年6月期间我院结核分枝杆菌rpoB基因检测阳性的100例患者，其中包括45例慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者和55例初治菌阳肺结核患者，对比分析两组患者利福平耐药性。结果：两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变分析，慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者利福平耐药率高于初治菌阳肺结核患者，P＜0.05。两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变性别分析，不同性别的初治菌阳肺结核患者利福平耐药率没有显著差异（P＞0.05）。不同性别的慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者利福平耐药率没有显著差异（P＞0.05）。结论：本次研究证实慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者的结核分枝杆菌rpoB基因突变率显著上升，慢性阻塞性肺疾病可能通过微环境改变，促进结核分枝杆菌耐药突变。临床在诊断该种类型疾病时，强化耐药性监测，为患者改善抗结核治疗方案，能够显著降低利福平耐药风险。

【关键词】肺结核患者；慢性阻塞性肺疾病；结核分枝杆菌rpoB基因；

在全球范围之内，结核病毒是属于重大公共卫生问题，结核病的耐药性演变机制始终是临床研究的重点[1]。2023年世界卫生组织针对全球结核病报告统计研究显示，利福平耐药结核病检出率较2013年显著提高了40%左右，其中结核病患者合并存在慢性基础性疾病，耐药风险更高[2]。本次研究开展的背景，首先是慢性阻塞性肺疾病会导致患者出现持续性气道炎症，对于患者的肺部局部微环境造成了破坏，而且慢性阻塞性肺疾病特有的氧化应激状态，以及出现的蛋白酶-抗蛋白酶失衡，可能为结核分枝杆菌提供了选择性压力[3]。还有就是在临床研究分析指出，慢性阻塞性肺疾病患者的肺结核治疗失败率要高于单纯的肺结核疾病患者，但是现有研究尚未明确rpoB基因突变在此过程中的具体分子机制[4]。还有相关研究显示，全球范围之内针对慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者，耐药性特征研究存在重视不足的情况，特别是针对亚洲群体的流行病学数据统计出现了严重缺失[5]。针对现有相关研究资料分析，慢性阻塞性肺疾病患者的肺泡巨噬细胞功能受阻，由此可能会加速结核分枝杆菌的适应性突变，而且患者在诊治期间长期使用支气管扩张剂类药物，可能会通过改变细菌代谢途径进而对于耐药性发展造成间接影响[6]。以上背景相关因素突出了本次研究开展的必要性需要，针对慢性阻塞性肺疾病背景下结核分枝杆菌耐药性突变规律进行总结，旨在揭示慢性炎症微环境，对于结核耐药性基因的进化影响，进而在开展针对性治疗期间提供分子流行病学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

实验时间：2024年7月-2025年6月，实验样本：100例结核分枝杆菌rpoB基因检测阳性患者，其中包括：45例慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者和55例初治菌阳肺结核患者。45例慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者包括男性24例、女性21例，年龄区间19-72岁，平均（65.01±3.62）年；55例初治菌阳肺结核患者包括男性25例、女性30例，年龄区间18-74岁，平均（52.46±5.32）年。

1.2 方法

针对慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核特殊病例，需要应用标准化流程检测结核分枝杆菌利福平耐药相关rpoB基因突变。实验室需要采集患者无菌晨痰样本，之后需要经过NALC-NaOH液化法处理后进行离心富集，抗酸染色确认阳性后冷冻保存备用。基因组在DNA提取的时候，选用硅胶膜吸附技术，在此过程中，需要控制核酸的浓度和纯度。之后使用特异性引物，做好PCR扩增rpoB基因RRDR区域处理，还能够确保优化扩增效率，主要通过优化反应体系和温度循环参数实现。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳验证后，运用高通量测序平台进行双链测序。序列分析采用专业生物信息学软件，重点筛查531、526和516密码子等关键位点的碱基变异情况，并对异常峰图进行双向验证。在整个检测操作环节，要做好质控，在开展每一批次实验的时候，均需要设立标准菌株对照，并且实施随机样本复测机制。在检测期间，检测到的基因突变，都需要在MGIT 960系统进行表型药敏验证。

1.3 观察指标

（1）两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变，包括野生型（利福平敏感）、突变（利福平耐药）。

（2）两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变性别分析。

1.4 统计学方法

SPSS21.0数据处理，计量资料（±s)，t检验，计数资料（n,%)，卡方检验，用P＜0.05表示有意义。

2 结果

2.1两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变

两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变分析，慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者利福平耐药率高于初治菌阳肺结核患者，P＜0.05。

表1   两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变n（%）

2.2两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变性别分析

两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变性别分析，不同性别的初治菌阳肺结核患者利福平耐药率没有显著差异（P＞0.05）。不同性别的慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者利福平耐药率没有显著差异（P＞0.05）。

表2  两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变性别分析n（%）

3 讨论

在全球范围之内，肺结核和慢性阻塞性肺疾病均属于高负担呼吸系统疾病，两种疾病合并感染在临床实践过程中并不少见。然而研究分析显示，慢性阻塞性肺疾病患者在长期使用糖皮质激素类药物治疗以及存在的免疫功能紊乱，气道炎症等会进一步加剧结核分枝杆菌的耐药性演变[7]。而且研究分析显示，近些年以来耐多药结核病的流行趋势发展较为严峻[8]。而利福平作为一线的抗结核治疗药物，在用药期间需要通过耐药性检测来指导治疗方案调整和药物剂量控制。本次研究聚焦于慢性阻塞性肺疾病合并，初治菌阳肺结核患者rpoB基因突变情况进行分析，目的是通过该项研究揭示这一特殊人群的耐养性[9]。特征能够为临床制定早期干预措施提供科学依据。如果不及时开展该项研究，会导致慢性阻塞性肺疾病合并肺结核，患者的耐药性被低估进而延误患者实施的治疗时机，进一步增加公共卫生负担[10]。慢性阻塞性肺疾病患者的肺部微环境与普通肺结核患者存在显著差异，长期慢性炎症可能导致氧化应激增强、局部免疫抑制及抗生素渗透性改变，这些因素均可能促进结核分枝杆菌的基因突变和耐药性发展[11]。然而目前关于慢性阻塞性肺疾病合并肺结核患者耐药机制的研究相对匮乏，特别是rpoB基因突变的系统性分析尚未深入[12]。本研究通过对比单纯肺结核患者与慢性阻塞性肺疾病合并肺结核患者的耐药率差异，证实了慢性阻塞性肺疾病可能作为耐药性发展的独立危险因素。rpoB基因是利福平耐药的关键靶点，其突变谱的解析有助于优化分子诊断策略，并为开发针对慢性阻塞性肺疾病合并肺结核患者的个体化治疗方案奠定基础。因此针对这一人群的rpoB基因突变研究不仅是理论上的必要补充，更是临床实践的迫切需求。本研究的成果对临床诊治具有多方面的指导意义：早期预警，通过rpoB基因突变筛查，可快速识别慢性阻塞性肺疾病合并肺结核患者的耐药风险，避免经验性用药导致的治疗失败。治疗方案优化，对于检测到高频突变（如531、526密码子）的患者，可优先考虑含二线抗结核药物的强化方案，减少耐药结核的传播风险。动态监测：在慢性阻塞性肺疾病患者中，定期监测rpoB基因突变有助于评估治疗响应，并及时调整策略。机制研究，本研究结果为后续探索慢性阻塞性肺疾病微环境如何促进结核分枝杆菌突变提供了线索，例如缺氧、炎症因子或药物代谢差异的可能作用，rpoB基因突变研究不仅提升了诊断效率，还为个体化治疗和耐药防控提供了科学工具。

两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变分析，慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者利福平耐药率高于初治菌阳肺结核患者，P＜0.05。分析原因，主要包括，慢性阻塞性肺疾病特征性的慢性炎症微环境导致活性氧自由基持续累积，这种氧化应激状态显著提升结核分枝杆菌DNA损伤风险，加速耐药突变累积。慢性阻塞性肺疾病患者肺泡巨噬细胞功能障碍形成的免疫缺陷微环境，为病原体提供了更长的存活周期和突变选择窗口。临床常用的糖皮质激素等慢性阻塞性肺疾病治疗药物可能通过药代动力学相互作用，干扰利福平的抗菌效能。两组患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变性别分析，不同性别的初治菌阳肺结核患者利福平耐药率没有显著差异（P＞0.05）。不同性别的慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者利福平耐药率没有显著差异（P＞0.05）。

综上所述，慢性阻塞性肺疾病与肺结核耐药性的重要关联，在分析结核分枝杆菌rpoB基因突变特征时，发现肺结核初治患者合并慢性阻塞性肺疾病会对利福平出现更高的耐药现象，研究发现的这一现象，说明慢性阻塞性肺疾病患者特殊的给不生理病变，为结核分枝杆菌基因突变提供有利的微环境。对于性别影响因素分析，未观察到性别因素对耐药率产生显著影响的证据。

参考文献：

[1]么建立,李秋平,张丽娜.Xpert MTB/RIF技术对痰涂片结核分枝杆菌感染及利福平耐药的诊断效能与耐药基因突变特征分析[J].传染病信息,2025,38(03):209-214+224.

[2]刘振嘉,范欣,陈曦,等.某综合医院Xpert平台检测结核分枝杆菌/利福平对结核病诊断的回顾性分析[J].传染病信息,2025,38(03):221-224.

[3]余彦廷,钟磊,万荣,等.2型糖尿病合并肺结核患者空腹血糖水平与痰涂片、T-SPOT.TB结果的关系及结核分枝杆菌rpoB基因检测临床意义[J].传染病信息,2024,37(02):137-141.

[4]蒋学峰,杨继黎,吕菊芬,等.慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变分析[J].宁夏医学杂志,2023,45(12):1077-1079.

[5]梅琳,张艳,钟彝蝶,等.结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测及结核感染T细胞检测在肺结核诊断中的应用价值[J].实用医技杂志,2023,30(05):314-317.

[6]陈蕾.四川地区结核分枝杆菌katG、inhA和rpoB基因突变位点耐药水平及突变频率特征分析[J].临床肺科杂志,2022,27(02):242-246.

[7]高春景,杨洋,阚宗卫,等.Xpert MTB/RIF对结核菌利福平耐药的诊断价值及rpoB基因突变特点的分析[J].临床肺科杂志,2021,26(05):723-727.

[8]刘春平,谭耀驹,苏碧仪,等.荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性的评价[J].广东医学,2021,42(04):377-381.

[9]董启珍,赵承杰,吴晓茹.基因芯片技术在新发涂阳肺结核患者结核杆菌菌种鉴定及药敏试验中的应用[J].中华医院感染学杂志,2021,31(07):1024-1028.

[10]叶海梅,刘杰,吴祖达,等.利用GenoType? MTBDRplus技术分析福州市结核耐药基因突变特征[J].热带医学杂志,2021,21(01):22-25.

[11]古丽娜·巴德尔汗,李远春,阿依努尔·莫合买提,等.DNA-微阵列芯片检测技术与Gene-Xpert MTB/RIF技术在新疆维吾尔自治区结核分枝杆菌耐药性诊断中的应用[J].检验医学与临床,2020,17(21):3113-3118.

[12]熊利巧,吴开进.4种结核分枝杆菌检测方法比较及Xpert MTB/RIF法对利福平耐药基因的分析[J].临床医学研究与实践,2020,5(20):117-119+123.