幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因检测指导个体化根除治疗的研究

【摘要】：目的：探索幽门螺杆菌（Hp）克拉霉素耐药基因检测指导个体化根除治疗。方法：选择本院2023年1月至10月在我院内镜中心行13C呼气试验及胃镜检查患者140例，随机分为对照组和实验组。对照组（n=32）应用阿莫西林+克拉霉素+奥美拉唑+胶体果胶铋四联根除方案，实验组一（n=75）（行焦磷酸测序法HP耐药基因检测示克拉霉素敏感组）应用阿莫西林+克拉霉素+奥美拉唑+胶体果胶铋四联根除方案，实验组二（n=33）（行焦磷酸测序法HP耐药基因检测示克拉霉素耐药组）应用阿莫西林+四环素+奥美拉唑+胶体果胶铋四联根除方案。停药4至6周行13C呼气时试验，复查HP是否根除。结果：本文K-B法体外药敏试验显示，敏感75例（69.44%），耐药33例（30.56%）。PCR检测到Hp对克拉霉素的耐药基因突变为23SrRNAV区的A2143G33例（94.29%）和A2142G突变2例（5.71%）。敏感病例中，73例（97.33%）23SrRNAV区无突变，2例（2.67%）23SrRNAV区有突变，耐药病例均为23SrRNAV区突变。药敏试验与耐药基因检测的一致性较好。对照组、实验组一、实验组二的Hp根除率分别为68.75%、86.67%、90.91%，实验组一和实验组二两组的Hp根除率比较无显著差异（P＞0.05），实验组一和实验组二两组的Hp根除率均高于对照组，差异显著（P＜0.05）。结论：Hp对一线治疗药物克拉霉素存在耐药性，对Hp进行耐药基因检测，可有效提高HP根除率。

【关键词】：焦磷酸测序法；幽门螺杆菌；克拉霉素耐药

Hp是一种呈螺旋形的格兰氏阴性菌，通常寄居于或附着于人的胃粘膜表面，被认为是导致慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌的主要因素之一[1]。呼吸测试法通过Hp分泌的脲酶将尿素分解为二氧化碳和氨气，患者通过呼气将产生的二氧化碳检测出来，这是一种非侵入性、简便快速的检测方法[2]。通过采集患者的血样，利用酶联免疫吸附检测等方法检测体内是否存在Hp相关的抗体，这种方法适用于初步筛查和判断感染情况，但无法确定是否存在活动感染[3]。通过内窥镜检查，在胃黏膜上取得组织标本，然后进行病理学检查，这是诊断Hp感染最准确的方法，可以直接观察到细菌的存在和组织损伤情况。利用聚合酶链式反应（PCR）等技术，从患者的胃黏膜标本中提取DNA，并通过特定的引物与Hp的基因进行扩增和检测，这种方法对于低菌载量的样本也能有较好的敏感性[4]。PCR是一种通过体外合成DNA的方法，它可以从极少数量的DNA模板扩增出大量目标DNA片段，PCR技术主要依赖于DNA聚合酶的催化作用，配合引物的特异性识别，以及反复进行的循环温度变化。Hp的分析可以帮助医生确定感染状态、评估治疗效果以及指导治疗方案的制定。根据检测结果，医生可以针对性地使用抗生素和其他药物来消除感染，预防并发症的发生。导致质子泵抑制剂、克拉霉素、阿莫西林三联治疗有效率逐年降低，其根本原因在于Hp对克拉霉素的耐药性。焦磷酸测序首先将待测序的DNA样本进行纯化、扩增和片段化处理，其次将特定序列的导向引物固定到固相载体上，并使其与待测DNA片段杂交，然后将多个焦磷酸核苷酸逐个加入反应体系，在每个碱基加入后检测产生的光信号，最后根据焦磷酸反应的光信号强度和顺序，将这些信息转化为DNA序列。基于此，本研究对Hp克拉霉素耐药基因检测指导个体化根除治疗进行了探讨，报告如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

选择本院2023年1月至10月在我院内镜中心行13C呼气试验及胃镜检查患者140例，随机分为对照组和实验组。纳入标准：①Hp感染患者；②Hp感染通过非侵入性测试方法（如呼气试验、粪便抗原检测等）确诊；③签署知情同意。排除标准：①孕妇、哺乳期女性以及计划怀孕的女性；②患有严重心脏、肝脏、肾脏或中枢神经系统疾病者；③曾接受过Hp根除治疗或其他相关治疗者；④患有同时存在的消化道疾病，如胃溃疡、胃癌等；⑤同时参与其他Hp相关研究的患者。对照组（n=32）男：女为20：12，年24-58（39.62±2.85）岁；实验组一（n=75）男：女为51：24，年龄25-56（38.93±3.14）岁；实验组二（n=33）男：女为22：11，年龄22-58（39.20±3.31）岁；本研究经医院伦理委员会批准。

1.2方法

对照组32例患者应用阿莫西林（1000mg，2次/d）+克拉霉素（500mg，2次/d）+奥美拉唑（20mg，2次/d）+胶体果胶铋四联根除方案；实验组一75例患者（行焦磷酸测序法HP耐药基因检测示克拉霉素敏感组）应用阿莫西林（1000mg，2次/d）+克拉霉素（500mg，2次/d）+奥美拉唑（20mg，2次/d）+胶体果胶铋四联根除方案；实验组二33例患者（行焦磷酸测序法HP耐药基因检测示克拉霉素耐药组）应用阿莫西林（1000mg，2次/d）+四环素（100mg，2次/d）+奥美拉唑唑（20mg，2次/d）+胶体果胶铋四联根除方案。所有患者都要连续服药两个星期，在服药的过程中不得服用其他药物，每日三餐需分餐。

1.3观察指标

停药4至6周行13C呼气时试验，比较三组患者的Hp根除率。

1.4统计学处理

采用SPSS20.0分析，计量资料()以t检验，计数资料（%）以x²检验，P＜0.05差异显著。

2.结果

2.1一般情况比较

三组一般情况比较均P＞0.05。见表1。

表1一般情况比较[n(%)]

2.2药敏试验和耐药基因分析

108例实验组患者的胃粘膜组织标本中，全部分离出 Hp菌株，涂片及革兰染色结果均为弧形逗号状、海鸥形态、短杆弯曲。K-B法体外药敏试验显示：敏感75例（69.44%），耐药33例（30.56%）。见表2。PCR检测到Hp对克拉霉素的耐药基因突变为23SrRNAV区的A2143G33例（94.29%）和A2142G突变2例（5.71%）。75例敏感病例中，73例（97.33%）23SrRNAV区无突变，2例（2.67%）23SrRNAV区有突变，33例耐药病例均为23SrRNAV区突变。药敏试验与耐药基因检测的一致性较好（P＞0.05）。

表2Hp根除率比较[n(%)]，n=108

2.3Hp根除率比较

实验组一和实验组二两组的Hp根除率比较无显著差异（P＞0.05），实验组一和实验组二两组的Hp根除率均高于对照组，差异显著（P＜0.05）。见表3。

表3Hp根除率比较[n(%)]

3.讨论

Hp是一种常见的胃肠道内的细菌，感染会引起一些消化疾病，如胃炎、胃溃疡、胃癌[5]。然而，随着时间的推移，Hp对常用抗生素的耐药性逐渐增加，这给治疗带来了挑战。在治疗Hp感染之前进行耐药检测非常重要，耐药检测可以确定哪种抗生素对特定患者有效，根据检测结果，医生可以针对性地选择最适合的药物组合，提高治疗成功率。耐药检测可以避免盲目使用已经失效的抗生素，如果没有进行耐药检测，可能会出现对抗生素产生耐药性的情况，从而导致治疗失败或耗费更多的资源。通过耐药检测，医生可以避免患者接受无效治疗的问题，减少药物的不必要使用，从而降低患者可能出现的药物副作用和不良反应的风险。根据耐药检测结果，医生可以个体化地制定治疗方案，选择对患者有效的抗生素组合，这有助于提高Hp感染的根除率，并减少复发的风险。Hp它可以通过多种机制来产生耐药性。在使用克拉霉素进行治疗时，部分Hp可能会通过基因突变或水平基因转移等方式，逐渐发展出对克拉霉素的耐药性。这使得原本有效的三联疗法在一些患者身上失去了疗效。不当使用克拉霉素也是导致耐药性产生的重要原因之一，长期滥用或过度使用克拉霉素会增加Hp对该药物的耐药性产生风险。例如，在没有经过敏感性测试的情况下，医生过度使用克拉霉素进行治疗，或者患者未按照医嘱完成全疗程，都会增加耐药性的风险[6]。除了耐药性的发展，其他因素也可能对三联疗法的治愈率产生影响。例如，患者的免疫状态、胃酸分泌水平以及药物合规性等因素都可能对治疗效果产生影响。如果患者的免疫系统较弱或者存在胃酸分泌异常，Hp可能更难被清除。针对这种情况，可以在使用克拉霉素治疗之前，进行敏感性测试，确定Hp对该药物的敏感性。如果发现耐药性，可以考虑调整治疗方案，选择其他有效的抗生素。针对病人的特定条件，采用个性化的治疗方法，例如，可以根据患者的耐药性情况选择其他抗生素，如呋喃唑酮或四环素类药物，并结合质子泵抑制剂和阿莫西林进行联合治疗。可以加强患者对治疗的理解和合作，确保按照医嘱完成全疗程，这有助于减少治疗失败和耐药性发展的风险。

焦磷酸测序是一种高通量测序方法，用于快速而准确地获取DNA或RNA序列信息。焦磷酸测序利用DNA聚合酶在DNA合成过程中释放的焦磷酸进行测序，当DNA聚合酶在复制DNA时加入正确的核苷酸后，会释放出一个焦磷酸分子。该焦磷酸与底物ATP结合并引发化学反应，产生光信号，通过检测这些光信号的强度和顺序，就可以确定DNA的序列。焦磷酸测序具能够同时测序多个样本，提高测序效率；由于检测焦磷酸释放的光信号，减少了误差；适用于基因组测序、转录组测序等各种研究领域。焦磷酸测序法在基因组学、医学、农业等领域得到广泛应用，它能够帮助科学家快速获取大量DNA或RNA序列信息，从而深入了解生物体的遗传信息和功能。本文K-B法体外药敏试验显示，敏感75例（69.44%），耐药33例（30.56%）。PCR检测到Hp对克拉霉素的耐药基因突变为23SrRNAV区的A2143G33例（94.29%）和A2142G突变2例（5.71%）。75例敏感病例中，73例（97.33%）23SrRNAV区无突变，2例（2.67%）23SrRNAV区有突变，33例耐药病例均为23SrRNAV区突变。药敏试验与耐药基因检测的一致性较好（P＞0.05）。首先，焦磷酸测序法具备较高的灵敏度，能够检测到低浓度的目标基因序列，并且能够准确识别不同的碱基。这就使焦磷酸测序成为一种高效的检测Hp中克拉霉素耐药基因的方法，从而确定耐药株和敏感株之间的差异。其次，焦磷酸测序法具备快速的特点。相比传统的Sanger测序方法，焦磷酸测序法能够在较短的时间内完成测序过程，这对于药物疗效评价来说尤为重要，因此，及时获得耐药性的相关信息有助于指导临床合理用药，改善疗效[7]。最后，焦磷酸测序法是一种半定量方法，它可以通过测定每个碱基位点的峰值强度来推测目标基因的相对含量[8]。这使得焦磷酸测序法不仅可以检测基因突变，还可以评估耐药基因的拷贝数，从而提供更详细和全面的信息[9]。本研究发现，对照组、实验组一、实验组二的Hp根除率分别为68.75%、86.67%、90.91%，实验组一和实验组二两组的Hp根除率比较无显著差异（P＞0.05），实验组一和实验组二两组的Hp根除率均高于对照组，差异显著（P＜0.05）。耐药基因检测是一种用于检测病原菌是否具有对特定药物的耐药性的方法。在针对Hp感染的治疗中，克拉霉素是一种常用的一线治疗药物。然而，由于Hp的耐药性问题，一些患者可能无法根除该细菌。通过对Hp进行耐药基因检测，可以确定其是否存在对克拉霉素的耐药基因，如果检测结果显示Hp具有克拉霉素耐药基因，那么使用克拉霉素进行治疗将不再有效，需要考虑其他替代方案。耐药基因检测有助于指导医生选择更有效的治疗方案，提高Hp的根除率。根据检测结果，医生可以结合其他具有抗菌活性的药物，如四环素、呋喃唑酮等，来制定个体化的治疗方案，这样可以增加根除Hp的成功率，并减少治疗失败和复发的风险。

综上所述，Hp对一线治疗药物克拉霉素存在耐药性，在高耐药地区或首次根除失败的患者行HP耐药基因检测，制定个体化根除方案，可有效提高HP根除率。

参考文献

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[6] 徐小青.黄连素联合四联疗法在幽门螺杆菌一线治疗中的作用研究[J].中国医药导报,2020,(19):78-81.

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[8] 钟雄陵.克拉霉素 兰索拉唑治疗幽门螺杆菌感染性 胃炎的效果及有效率影响研究[J].医药界, 2021, 000(017):P.1-2.

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