风湿骨痛胶囊定性与定量质量控制方法分析

【摘要】目的：分析风湿骨痛胶囊在定性与定量分析方法下的测定结果，并从中归纳质量控制方法。方法：选择国药准字Z34020025的风湿骨痛胶囊充当分析样本，采用薄层色谱与高效液相色谱分析法统计成分含量，以碘蒸气、三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液作为显色剂与展开剂，统计甘草酸含量、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酸乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱定性分析结果。结果：定性分析中可见清楚斑点和适合的相对标准偏差，呈现良好的分离状态。定量分析中苯甲酰次乌头原碱、苯甲酸乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱含量均有良好的线性关系，其相关系数在0.99到1.00之间；不同批号下含量分别在1.7mg/粒到2.0mg/粒以内；11.3μg/粒到13.2μg/粒以内；9.7μg/粒到13.2μg/粒之间；35.1μg/粒到60.9μg/粒之间。结论：风湿骨痛胶囊采用定性与定量分析法测定含量时，此法重复性优良，具有高灵敏度，为保障该药品得以广泛推广，宜加强药量有效质量，以保障药品生产质量。

【关键词】风湿骨痛胶囊；薄层色谱法；高效液相色谱法；定性分析；定量分析

风湿骨痛胶囊作为中成药品，临床治疗属于抗风湿特效药，主要含有制川乌、制草乌、甘草、麻黄等多种中药材，经过药材科学配伍，可达到温经散寒、通络止痛功效，其适应症为寒湿闭阻经络所致痹病，症见四肢关节冷痛及风湿性关节炎等。基本上患者口服用药后，能快速改善因经脉痹阻、寒湿入体所致风湿性疾病的病情，充分缓解腰腿疼痛、关节肿胀等典型病症。然而，该药物发挥活血化瘀药效过程中，为进一步控制药品质量，提升用药安全性，宜围绕药品所含中草药成分实施定性与定量分析，以便有关药企从中获得可靠指导后，在药品加工生产环节能找到明确的优化方法，进而在保障药效基础上抑制药量不当所引起的毒副作用[1，2]。作为中成药，在药量控制方面必然要遵照医药典籍标准进行优化调整，尤其对于乌头碱、麻黄等药品成分，可专门采用薄层色谱法与高效液相色谱法实施定性与定量分析，以便为后续该药品在临床治疗阶段的广泛推广给予助力，切实维护药品使用安全。本文于某院选择特定风湿骨痛胶囊药品进行定性与定量分析，从中归纳质量控制要点。

1资料与方法

1.1一般资料

此次研究中选择国药集团生产的风湿骨痛胶囊（国药准字Z34020025）作为分析样本，以定性与定量质量控制方法分析样本时，选用EXPEC 5210液相色谱-三重四极杆质谱联用仪和TQ-142型薄层色谱仪作为实验仪器。其他材料包括超声波清洗机（洁盟3800S，容量600mL；超声波频率40000Hz）、电子天平（MTL-XS205DU）、水纯化器（UPW50N）、硅胶预制板（GF254）等。该药品内含有的苯甲酰次乌头原碱、苯甲酸乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱成分，其纯度均在98%以上。同时还在该研究项目开展期间购进纯度在98%以上的甘草酸单铵及甘草苷、原儿茶酸等原料。按照标准渠道购进合规的药品主要成分原材料，即麻瓜、制草乌、乌梅、红花、麻黄、制川乌等，均来自山东煜和堂药业有限公司。

1.2调查方法

对风湿骨痛胶囊进行定性与定量分析，其中定性分析采用薄层色谱法，定量分析采用高效液相色谱法。

前者则围绕药品主要成分建立薄层色谱，从色谱图显示结果中进行定性分析。所选药品中含有多种生物碱成分，并采用含有制草乌、制川乌、麻黄等中药材成分的溶液充当参考对象。其溶液则以1mg麻黄碱加入1mL甲醇溶液；0.5mg苯甲酰新乌头原碱加入1mL甲醇溶液，1mg伪麻黄碱加入1mL甲醇溶液的标准制备混合液充当参考试样。观察试样则将试样溶液容量控制在3mL，含有适量制草乌与制川乌成分，对该溶液进行减压回收处理后投放到1mL甲醇溶液内制成含有麻黄成分的观察试样[3]。至于制草乌及制川乌等观察试样溶液的制备，则称取各2g中药材，测定项下经过处理后，将1mL甲醇溶液投入观察试样的中药材残渣内制备成对应的对比溶液。此法应用期间含有显色剂与展开剂，故定性分析过程宜优选试剂。显色剂则选用碘蒸气、茚三酮溶液开设对比实验，于254nm波长条件下进行显色分析，确定以碘蒸气充当显色剂时，可见显色反应，两种成分均具有显色表现，故最终认定该研究项目所用显色剂为碘蒸气。展开剂则对比质量比为

32：18：5的正己烷-乙酸乙酯-甲醇溶液与质量比为4：

1：0.1的三氯甲烷-甲醇-浓氨；4：7：6：2的正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇溶液对麻黄碱（盐酸伪麻黄碱与盐酸麻黄碱）溶液的分离效果，显然第二种展开剂下可见清楚斑点与良好的分离状态[4]。故该研究中所选显色剂与展开剂分别为碘蒸气、三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液。

后者则建立高效液相色谱条件进行定量分析，该分析方法下，按照0min到60min不同洗脱时间下的流动相A与B的梯度差异，制备参考试样和观察试样。即0到40min洗脱时间内流动相A与B浓度为15%、85%；40min到43min为15%、85%；25%、75%；43min到60min则为25%、75%。色谱柱规格为25×0.46cm，设置235nm的波长参数。流动相A溶液的制备则以0.5mL冰醋酸混合1L醋酸铵（浓度0.1mol/L）[5]。制备观察试样时则制备容量为1mL的混合液，含有20μg苯甲酰次乌头原碱，25μg苯甲酸乌头原碱，90μg苯甲酰新乌头原碱。而后在锥形瓶内投放25mL盐酸溶液（浓度0.1mol/L），将2g风湿骨痛胶囊内容物放入其中，使用超声波清洗机进行科学处理，设定40kHz频率和400W功率参数。经过持续四十分钟超声波处理后，以适量盐酸溶液弥补振荡处理损失，而后获得15mL上清液。此时按照质量比为10：90投放乙腈溶液和甲醇溶液实施洗脱操作，并按照先投入6mL乙腈溶液进行预处理，后放入20mL盐酸溶液的顺序实施持续洗脱操作，随即在40℃左右的温度条件下对定量处理后的混合液进行回收[6]。制备甘草酸溶液时，则将1mL甲醇（50%）与30μg甘草酸铵进行混合，此时可制取甘草酸溶液。经过对定性与定量分析方法下所需溶液进行制备后，观察风湿骨痛胶囊主要成分及其内容物测定结果。

1.3观察指标

观察风湿骨痛胶囊主要成分的定性与定量分析结果。

1.4定性与定量分析方法

以Y=12.79x-7.3206；r2=0.9998回归方程统计分析结果；以RSD=公式计算相对标准偏差（relative standard deviation RSD；SD表示标准偏差；X表示计算结果的算术平均值）；当甘草酸峰面积RSD保持在1.5%左右，则表示具有定性与定量分析试样具有良好稳定性。

2结果

2.1分析不同定性分析指标标准曲线参数：

对风湿骨痛胶囊内容物进行定性分析时，可发现三种主要成分具备良好的线性关系，其相关系数均在0.99到1.00之间，如（表1）所示。

表 1 不同定性分析指标标准曲线参数分析

2.2  统计不同批号下药品成分定量分析结果

对不同批号下的药品成分进行定量分析，可得出对应的药量范围，具有良好的重复性，如（表 2）所示。

表 2 不同批号下药品成分定量分析结果

3讨论

根据对风湿骨痛胶囊药材配伍规律的分析，发现其主要药材中含有麻黄、制川乌、制草乌，其中麻黄及乌头碱成分，一般在合用下可能对用药者心血管系统带来一定危害，甚至麻黄成分还会增加乌头碱的毒性强度，造成某些用药者服药后出现心血管损伤或乌头碱中毒问题，不仅危及患者健康，还会限制该药品在临床治疗中发挥鲜明作用，从而影响患者对药品安全性的信任[8，9]。因此，为有效控制药品质量，主张采用定性与定量分析方法，关注制川乌等含有乌头碱成分的中药材的标准剂量，使之与其他药材配伍后具备安全强效优势。结合上述研究数据知晓：对风湿骨痛胶囊进行定性与定量分析后，可得出线性范围及药品含量范围，以指引有关药品生产企业在药品质量控制工作中找到最佳优化路径，由此扩大该药品的推广范围。围绕学者陈家仪[10，11]早期对风湿骨痛胶囊药效水平及毒副反应的调研结果，发现临床用药期间，存在明显的药量过大问题，导致患者用药时因摄入的乌头碱成分超出安全范围而发生毒性反应。其中91岁到100岁老年患者的药物利用指数超出标准值147%，且处方用药患者中有57.5%属于女性，而利用用药频度较高的当属61岁到70岁老年人。考虑到剂量超标，将降低药品安全水平，严重时还会影响老年患者的生存质量，因而对药品成分性质及乌头碱等含量予以定性与定量分析很有必要。

于定性分析中所用薄层色谱法，能根据活性成分的定性分析判断当前药品中发挥消炎止痛作用的麻黄药材，其所含盐酸伪麻黄碱与盐酸麻黄碱，是否会对药品安全带来干扰。经过显色反应能确定在相同薄层预制板下使用展开剂与显色剂实施显影分析，能以抗氧化活性反应确定活性物质种类。而在高效液相色谱法下进行定量分析，可对含有乌头碱成分的制草乌、制川乌等成分含量予以筛查，若确定两种含有毒性作用的中药材，其含量处于安全标准内，则判断与麻黄合用后不易增加毒副反应发生风险。特别是在统计总单酯型生物碱成分含量时，能指引药物有关人员找到引发毒性反应的含量限值，继而在不影响药效的前提下，严控药品中制川乌、制草乌、麻黄等药材的配伍比例。经分析确认优化该药品质量时，宜依据定性与定量分析结果，严控乌头碱类成分含量。

此次研究所得数据与学者陈良妮[12-14]不同时间段内所获得的研究成果大体上相符，故此次研究内容具备参考价值，且不同批次之间药品质量具有突出一致性。而在学者刘焕起[15]等人近期建立的指纹图谱显示结果中，发现片剂与胶囊剂在成分含量部分略有差异，但主治功效与药品质量较为相近，因此可结合给药途径和具体用药需求优选药品剂型。今后也将继续对该药品的临床疗效进行追踪记录，以此从药品安全性、药量适用性等多个角度实施深度调查，继而为该药品在临床领域中的有效推广提供支撑。

综上所述，风湿骨痛胶囊经定性与定量分析，可得到可靠的质量控制方法参考依据，且具有良好的重复性与高准确度，因此可借助此法确定药品优化重点。

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作者简介：黎秋菊（1987.08-），女，贵州人，汉族，本科，主管中药师，研究方向：中成药质量控制。