玉溪市红塔区3204例人乳头瘤病毒筛查与宫颈病变的研究

摘要：宫颈癌是女性发病率最高的疾病，严重危害妇性的健康。目的：研究人乳头瘤病毒PCR快速法（POCT组）及常规PCR方法的检测比较;本组的感染率; HPV阳性与细胞学诊断及阴道镜检测结果的相关性。方法：通过2024年7月至2024年12月来玉溪市红塔区妇幼保健院体检的3204例女性目标人群（适合条件的人群）随机分组，观察POCT组与常规检查组的对比；HPV感染与细胞学诊断及阴道镜检测结果的相关性；病理检查结果与阴道镜结果的对比。结论：人乳头瘤病毒POCT组与常规PCR组的检查阳性率均为6.12%，18型检测中p>0.05无差异，但在16型、其他13种不分型、混合感染检测中p<0.05，存在显著差异，因POCT组时间快、仪器小、适合于基层推广应用；本组的感染率为7.24%，主要的型别为HPV52、HPV58、HPV16、HPV53、HPV51、HPV56，混合感染为以HPV52+与HPV58+占比较大，HPV16+与52+次之，双重感染或者多重感染增多；宫颈癌筛查方式首先HPV检测与薄层液基细胞（TCT）联合筛查，配合与阴道镜检测及病理结果才能准确的诊断。

关键词 宫颈癌；人乳头瘤病毒；POCT； 薄层液基细胞

官颈癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤，发病率逐年上升[1]，而宫颈癌的发病与人乳头瘤病毒密切相关。人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种专性感染人表皮和黏膜鳞状上皮细胞的双链DNA病毒,主要通过性传播感染。HPV感染是导致宫颈上皮内瘤(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)[1-2]和宫颈癌的主要因素[3-4]。

1 资料与方法

1.1研究对象

   收集2024年7月至2024年12月来玉溪市红塔区妇幼保健院免费两癌筛查的对象，采集宫颈脱落细胞检查HPV,共3204例。宫颈癌筛查纳入标准：35-64岁女性；有性生活、具有完整子宫颈、无肉眼可见的典型宫颈癌体征；自愿签署书面知情同意书。 排除标准：怀孕；有宫颈治疗史、骨盆放射治疗史；既往诊断过的宫颈癌患者。此3204例随即分配为人乳头瘤病毒PCR快速法实验组（POCT）1602人，常规PCR筛查组1602人，POCT组筛查阴性标本再用常规组方法复核，两组筛查出HPV阳性的标本用另外一种分型试剂进行分型。

1.2方法

1.2.1标本采集

采集前要求：检查应在非月经期内进行，被采集对象48小时内不应有性行为，检查3天内不应进行阴道冲洗或使用避孕药膏等阴道内用药。

标本采集：使用一次性无菌宫颈采样器（包含宫颈刷及细胞保存液）进行样本采集，具体操作步骤如下： 对于妇女宫颈可疑感染患者，采集宫颈口脱落细胞。采样前用棉拭子拭去宫颈口过多的分泌物，将宫颈刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转3至4圈。慢慢取出宫颈刷，将其放入装有细胞保存液的样本收集管中。在管口处将多余的刷柄折断，密闭送检。

标本采集注意事项：取样前请移除过多的宫颈粘液或其他分泌物。可用钳子夹取纱布垫或用棉球轻轻蘸去分泌物，或使用干燥的长棉签清除（不可来回擦拭，应蘸取移除）；不能用生理盐水清洁宫颈，否则可能导致标本的细胞数量过少。如果受检妇女的宫颈呈重度糜烂样外观，可照常取样，但需要注意力度，以免出血；如果宫颈口有活跃出血，应止血后再取样。否则，会取到过多的血细胞。可用钳子夹取纱布或棉球压迫止血；由于本组需要进行HPV检测，故每次取样结束后必须双手更换手套，避免标本的交叉污染。

1.2.2 HPV检测  

  试剂一：采用人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法），对高危型人乳头瘤病毒（HPV）16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、53型、56型、58型、59型、66型、68型这15种型别的E区核酸保守序列设计多套特异性引物和荧光探针，配以PCR反应液等组分，在荧光定量PCR仪上，应用多重实时荧光定量PCR检测技术，通过4种荧光信号（FAM、HEX/VIC、ROX、CY5）的变化实现人乳头瘤病毒15种型别DNA的快速检测，并能分型鉴定人乳头瘤病毒16型及18型,其他13种不分型，厂家为湖南圣湘生物科技股份有限公司。

试剂二：高危型人乳头瘤病毒核酸（分型）检测试剂盒 (PCR-荧光探针法)，本试剂盒用于体外定性检测女性宫颈脱落上皮细胞样本中的高危型人乳头瘤病毒（HPV）16 型、18 型、31 型、33 型、35 型、 39 型、45 型、51 型、52 型、53 型、56 型、58 型、59 型、66 型、68 型这 15 种型别的核酸 DNA，并鉴别基因型。厂家为湖南圣湘生物科技股份有限公司。

仪器：POCT组为核酸检测分析仪S-Q31B,常规组为宏石SLAN-96P全自动PCR分析系统。

1.2.3  薄层液基细胞学检查TCT：自动液基细胞制片仪APD-4800A。

1.3   统计学分析  采用 ＳＰＳＳ 17.0版软件进行统计学处理。

2 结果

2.1 人乳头瘤病毒检测结果  3204例受检标本中阳性为196例（6.12%），其中HPV16型阳性的为20例（0.62%），HPV18型阳性6例（0.19%），HPV其他13种不分型阳性164例（5.12%），混合感染6例（0.19%）。

2.2  两组仪器的比较  POCT组总检测1602例，阳性例为98例（6.12%），其中HPV16型阳性为9例（0.56%），HPV18型阳性3例（0.19%），HPV其他13种不分型阳性86例（5.36%），混合感染0例; 常规组总检测1602人，阳性例为98例（6.12%），其中HPV16型阳性为11例（0.69%），HPV18型阳性3例（0.19%），HPV其他13种不分型阳性78例（4.87%）.混合感染6例（0.37%）,POCT组和常规组在总阳性检测率及18型检测率上没有差异，但在16型、其他13种不分型、混合感染检测中p<0.05，存在显著差异。见表1

        表1  两组检测情况

2.3 本地区HPV3204例筛查人群，总阳性232例（假阴性为36例），阳性率为7.24%，进行人乳头瘤病毒基因分型检测，HPV52型感染占21.98%；HPV58型感染占10.78%；HPV16型感染占8.62%；HPV53型感染占6.47%；HPV51型感染占5.60%；HPV56型感染占4.31%；最为多见的为两种型别的混合感染占20.69% 见表2及图一

表2   HPV阳性基因分型结果

图一

 单一感染为5.43%，二重感染为1.49%，三重感染为0.25%,四重感染为0.07%。感染以单一感染为主，多重感染中以二重感染为优势，需要引起重视。见表3及图二

表3  单一与多重HPV感染率

图二

2.4 HPV感染与细胞学诊断的相关性:常规组98例HPV阳性病例与细胞学病变的情况,16型与细胞学病变的情况P<0.05，差异性较大，18型、33型、52型、53型、58型、混合型及其他型别与细胞学的病变成一定的相关性，总体趋势HPV阳性与宫颈细胞学病变成正相关性。见表4

表4 常规组98例HPV阳性病例与细胞学病变的情况（%）

2.5 POCT组HPV阳性与阴道镜检查的相关性:POCT组最终134例HPV阳性(其中36例为假阳性）与阴道镜情况的关系，16型与阴道镜检测的情况P<0.05，差异性较大，18型、33型、52型、53型、58型、混合型及其他型别与阴道镜检测的情况成一定的正相关性，相关性的一致性与阴道镜检查需要操作人员具备熟练的技术及丰富的临床经验关系较密切。见表5

表5  POCT组HPV阳性与阴道镜检查的情况（%）

2.6  病理结果与阴道镜的对比：88例做病检结果与阴道镜结果的比较，x2=23.8,p<0.01,两组结果差异性较大，阴道镜检查依靠操作人员的肉眼及临床经验，最终诊断结果及治疗方法的确定必须以病理结果为金标准。见表6

表6  88例病理结果与阴道镜结果的对比（%）

3 讨论

人乳头状瘤病毒(HPV)是一类广泛感染于人体皮肤和黏膜表面的DNA病毒,其感染是一种常见的性传播疾病,对全球女性健康构成了重大的威胁[5]。现已明确高危型HPV持续性感染是宫颈癌[6]及癌前病变发生的主要诱因之一，寻找适合本地区的筛查方式，通过比对人乳头瘤病毒检测POCT组和常规组在总阳性检测率及18型检测率上没有差异；POCT组仪器小，检测速度快，适合应用于基层的初筛，但其在16型、其他13种不分型、混合感染检测中p<0.05，与常规组存在显著差异，也要重视这一部分差异，缩短随访周期，补充TCT及阴道镜检测。

本组HPV感染率为7.24%,这感染率低于2019年-2022年广东佛山20.86%[7]、2019年-2022年上海15.80%[8]、连云港地区女性 HPV 总感染率为 25.71%[9]等，这可能是以近几年HPV疫苗的推广有密切关系。本组研究中流行的型别是HPV52、HPV58、HPV16、HPV53、HPV51、HPV56；单一感染为5.43%，二重感染为1.49%，三重感染为0.25%,四重感染为0.07%，感染以单一感染为主，多重感染中以二重感染为优势，二重感染中以HPV52+与HPV58+占比较大，HPV16+与52+次之，双重感染或者多重感染增多，也可能与临床用药不规范有一定关系，与人们的生活方式也有关系，对这一部分人群增加随访监测频次，规范合理的用药及治疗，加强健康教育。

HPV阳性与细胞学诊断具有很好的相关性：16型与细胞学病变的情况，差异性较大，18型、33型、52型、53型、58型、混合型及其他型别与细胞学的病变成一定的相关性，总体趋势HPV阳性与宫颈细胞学病变成正相关性，HPV持续感染是造成宫颈细胞病变的重要因素之一。

HPV阳性与阴道镜检查有很好的相关性：16型与阴道镜检查的情况，差异性较大，18型、33型、52型、53型、58型、混合型及其他型别与阴道镜检查的情况成一定的正相关性，相关性的一致性与阴道镜检查需要操作人员具备熟练的技术及丰富的临床经验关系较为密切。

病理结果与阴道镜检查结果的相关性：阴道镜检查依靠操作人员的肉眼及临床经验，最终诊断结果及治疗方法的确定必须以病理结果为金标准。

综上所述：本组研究中POCT仪器小，检测速度快，适合应用于基层的初筛；本组的感染率为7.24%，主要的型别为HPV52、HPV58、HPV16、HPV53、HPV51、HPV56，混合感染为以HPV52+与HPV58+占比较大，HPV16+与52+次之，双重感染或者多重感染增多；宫颈癌筛查方式首先HPV加TCT联合筛查，配合与阴道镜检查及病理结果才能准确的诊断，在后续的随访与干预中起到重要作用。 

参考文献：

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