某地区中孕期妇女羊水培养检出胎儿染色体核型异常率的分析

【摘要】目的：分析某地区中孕期妇女羊水培养检出胎儿染色体核型异常的情况。方法：样本筛选于产前诊断中心行羊水穿刺进行羊水细胞培养及染色体核型分析的孕中期高危孕妇中开展，于2021年1月开始、于2024年12月停止，纳入2555例患者。对检出情况进行分析。结果：2555例患者的羊水穿刺和羊水细胞培养均一次成功，检出染色体异常121例，其中372例孕中期母血清筛查高风险妊娠检出11例、582例年龄≥35岁检出10例、591例超声异常检出25例、148例无创DNA显示异常检出58例、338例不良孕产史检出8例、406例双方同型地贫携带者检出6例、42例不良接触者检出1例、76例孕早期服药史2例。121例染色体异常中数目异常56例，其中21-三体综合征占比最高、18-三体综合征和13-三体综合征次之；性染色体异常40例；结构异常25例，其中衍生染色体占比最高。56例染色体数目异常者均选择终止妊娠，40例性染色体异常者中14例选择继续妊娠至分娩、26例选择终止妊娠，25例染色体结构异常者中12例选择继续妊娠至分娩、13例选择终止妊娠。结论：孕妇孕中期行羊水穿刺进行羊水细胞培养及染色体核型分析，可及时发现染色体异常的胎儿，为临床产前诊断提供重要的依据，从而使出生缺陷率下降。

【关键词】：中孕期；羊水培养；胎儿染色体核型

我国是出生缺陷率较高的国家，每年出生人口中出生缺陷占比约为4%-9%，染色体异常是导致胎儿发育畸形和出生缺陷的一大主要因素[1]。相关统计资料显示，我国每年出生的染色体异常婴儿约为10万例，在出生缺陷遗传学病因中的占比＞80%[2]。近年来，我国生育政策的开放使得高龄人群优生优育问题增加突出，分析原因是随着年龄的增长，孕妇机体内纺锤体聚合检验点被磨损等导致精确分离染色体的能力下降，延长了第一次减数分裂的时间，进一步老化了卵母细胞，使染色体出现了不分离的现象，导致形成的卵子染色体数目异常，增加了患者胎儿染色体异常的发生率[3]。因临床尚无有效治疗染色体病的方法，当前临床多通过产前筛查、产前遗传咨询等措施早发现、早诊断，并给予适时的干预措施，以降低出生缺陷的发生率。为了分析某地区中孕期妇女羊水培养检出胎儿染色体核型异常的情况，本文进行了下述研究：

1.资料与方法

1.1临床资料

于产前诊断中心行羊水穿刺进行羊水细胞培养及染色体核型分析的孕中期高危孕妇中开展样本筛选，2021年1月和2024年12月分别为样本筛选的开始和截止时间。样本为2555例，15岁为最小年龄、46岁为最大年龄，计算得出的平均年龄为（29.36±6.52）岁；穿刺孕周最小为16周、最大为31周，（23.29±2.76）周为计算得出的平均穿刺孕周。所有研究对象对本次研究的内容和目的充分知晓，签署了《知情同意书》。

纳入标准：①孕中期母血清筛查高风险者；②不良孕产史者；③孕检时超声检查异常者；④产前无创筛查结果显示阳性者；⑤高龄妊娠者；⑥夫妇双方同型地贫携带者；⑦不良接触者；⑧孕早期服药者。

排除标准：①近期行细胞治疗者；②近期行异体输血治疗者；③既往染色体非整倍体疾病史者；④无法配合完成穿刺术者；⑤不具备完整临床资料者。

1.2方法

1.2.1羊水细胞培养

在超声引导下对孕妇行羊膜腔穿刺术，抽取20mL羊水，分别等量注入两个15mL的离心管中，采用转速为1500r/min的离心机离心10min，去除上清液，留取0.5mL羊水和沉淀，将其混匀，每管接种 1瓶培养基，一瓶加4mLgibco羊水细胞培养基，另一瓶加4mL和能羊水细胞培养基，分别对两瓶进行标记，然后置于2个不同的5%CO2培养箱中培养，温度为37℃，连续培养7d，发现培养瓶中出现5-7个集落中圆形透亮细胞可进行收获。

1.2.2制片及显带分析

收获后，在每个细胞瓶中加入40ug/mL秋水仙素，使其与细胞液混合均匀后，放入37℃恒温箱中继续培养1.5h，再收集细胞进行制片，将制好的细胞片置于75℃烤箱中进行5h烤片，再进行G显带、吉姆萨(Gimsa)染色。然后，采用全自动显微镜染色体扫描分析系统对染色细胞进行扫描分析，每例计数 30 个中期分裂相，分析5个核型；对异常核型则计数100个分裂相，核型分析加倍，计算百分率，最后，根据人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN2016)对检出的染色体异常情况进行命名。

1.3观察指标

（1）孕妇染色体异常核型检出情况。

（2）染色体异常胎儿的具体类型情况。

（3）数目异常核型分布及妊娠结局。

（4）性染色体异常核型分布及妊娠结局。

（5）结构异常核型分布及妊娠结局。

1.4统计学方法

以SPSS26.0统计学软件对数据进行分析和处理，P＜0.05则表示有统计学意义。

2.结果

2.1孕妇染色体异常核型检出情况

表1中数据显示：2555例患者的羊水穿刺和羊水细胞培养均一次成功，检出染色体异常121例，其中372例孕中期母血清筛查高风险检出11例、582例年龄≥35岁检出10例、591例超声异常检出25例、148例无创DNA显示异常检出58例、338例不良孕产史检出8例、406例夫妻双方同型地贫携带者检出6例、42例不良接触者检出1例、76例孕早期服药史2例。

表1 孕妇染色体异常核型检出情况（n，％）

2.2染色体异常的具体类型情况。

表2中数据显示：121例染色体异常中数目异常56例（46.28%），其中21-三体综合征占比最高（36.36%）、18-三体综合征（7.43%）、嵌合体（1.65%）和13-三体综合征（0.83%）；性染色体异常40例（33.06%）；结构异常25例（20.66%），其中衍生染色体占比最高（10.74%）。

表2 染色体异常胎儿的具体类型情况（n，%）

2.3数目异常核型分布及妊娠结局

据表3可见：56例染色体数目异常者均选择终止妊娠。

表3 数目异常核型分布及妊娠结局（n，%）

2.4性染色体异常核型分布及妊娠结局

据表4可见：40例染色体结构异常者中14例选择继续妊娠至分娩、26例选择终止妊娠。

表4 性染色体异常核型分布及妊娠结局（n，%）

2.5结构异常核型分布及妊娠结局

表5可知：25例染色体结构异常者中12例选择继续妊娠至分娩、13例选择终止妊娠。

表5 结构异常核型分布及妊娠结局（n，%）

3.讨论

出生缺陷不仅会引起早期流产、死胎，还会造成围产儿死亡、婴幼儿死亡和先天残疾等，不仅与染色体畸变和基因突变等遗传因素有关，还与环境因素的关系密切。产前及时进行诊断是降低出血缺陷率、实现优生优育的关键措施[4]。

血清学筛查是于孕中期对母体血清中的相关指标进行检测以对胎儿异常的风险进行评估，因操作简单、费用低等在临床上的应用较为广泛[5]。本次研究中，372例经血清学检查存在高风险妊娠孕妇检出11例染色体核型异常。超声检查是临床产前诊断中最直观的检查手段，发挥的作用越来越大，可越来越精细、越精确地检出胎儿畸形，染色体异常引起的胎儿生长发育异常多数情况经超声检查可直接被发现[6-7]。本次研究中，591例经超声检查异常者检出25例核型异常。

近年来，科学技术的快速发展使高通量基因测序技术在临床上广泛应用，将其用于产前无创筛查中，是通过对母体血浆中胎儿游离DNA进行分析以检测胎儿染色体拷贝数的异常情况[8]。因胎儿游离DNA是临床产前无创筛查的科学基础，但因胎儿游离DNA几乎全部来源于胎盘滋养层细胞，受母体体细胞嵌合、胎盘嵌合、双胎消失、母亲癌症等因素的影响易出现假阳性的情况[9]。本次研究中，148例无创DNA显示异常者检出58例核型异常。

羊膜腔穿刺术和羊水细胞染色体核型分析用于胎儿染色体病的产前诊断中，可有效降低出生缺陷的发生率，也是当前产前诊断细胞遗传性疾病的金标准，但作为有创性检查，存在流产及宫内感染等风险[10]。因孕早期进行羊膜腔穿刺时虽有活性的羊水细胞占比较高，但羊水细胞数量较少，导致羊水细胞难以聚集进行克隆，无法获取足够的核型；孕晚期进行羊膜腔穿刺时羊水细胞的活力会大大减弱，羊水中胎粪和胎脂的含量较高，对羊水细胞生长的抑制作用较强，故培养的效果欠佳[11]。而孕中期羊水细胞数量适中且活性较好，进行细胞的常规接种、培养、传代和收获所获得的核型均较完美，是进行羊水细胞培养的最适合时期[12]。

在染色体异常疾病中，唐氏综合征（21-三体综合征）较为常见，是多了一条21号染色体而致病，早期流产率约为60%，存活着多表现为重度或中度智力下降、特殊面容、生长发育障碍和各种先天畸形等，发生率约为1/600-1/800[13]。 18-三体综合征的发生率约为0.03%，于仅次于21-三体综合征，是第二种常见的染色体三体征，出生后以发育迟缓、成长速度异常延迟、智能障碍和肾脏残废等为主要表现，且因摄食困难和呼吸困难导致死亡率较高。13-三体综合征，与21-三体综合征相比，此类存活儿的畸形和临床表现更严重，出生后1个月死亡的患儿约为45%、出生后6个月内死亡患儿约为90%，仅不足5%的患儿可存活至3岁[14]。本次研究中，121例染色体异常中数目异常56例（46.28%），其中21-三体综合征占比最高（36.36%）、18-三体综合征（7.43%）、嵌合体（1.65%）和13-三体综合征（0.83%），均选择终止妊娠。

在染色体结构异常中平衡易位和倒位是主要形式，也是导致生育异常的主要原因[15]。染色体平衡易位在对断裂点上的基因没有造成破坏的情况下，携带者不会出现遗传物质的缺失，故绝大多数个体无异常情况出现，但此类患者生育后代时，生殖细胞减数分裂的过程中会对遗传物质的形成造成干扰。本次研究中，121例染色体异常中结构异常25例（20.66%），其中衍生染色体占比最高（10.74%）；12例选择继续妊娠至分娩、13例选择终止妊娠。

性染色体病指的是性染色体的数目异常或结构畸变而引起的一种疾病，又被称为性染色体异常综合征，以性腺发育不全或两性畸形为临床共同特征。本次研究中，121例染色体异常中性染色体异常40例（33.06%），14例选择继续妊娠至分娩、26例选择终止妊娠。

综上所述，孕妇孕中期进行产前诊断，可及时发现染色体异常的胎儿，为临床产前诊断提供重要的依据，从而使出生缺陷率下降。

参考文献:

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河池市科技计划项目合同：项目名称（桂西北地区壮族中孕期妇女羊水培养检出胎儿染色体核型异常率的分析研究 合同编号：河科AB220770）