布鲁氏菌病血清学检查中荧光偏振法的应用

摘要：目的：分析在布鲁氏菌病检查中荧光偏振法进行血清学检查的应用效果。方法：在2023年全年期间，收集布鲁氏菌病重点监测群体的血清244份，以WS268-2007使用布鲁氏菌诊断标准作为金标准，同时采用荧光偏振法（FPA）、虎红平板凝集试验法（RBT）分别对血清样本进行检测，分析两种检测方法的灵敏度和特异性。结果：FPA检查灵敏度为94.24%，特异性为95.24%；RBT检查灵敏度为86.33%，特异性为83.81%；FPA检查的灵敏度和特异性更高（P＜0.05）；FPA法的各项诊断效能均优于RBT法（P＜0.05）。结论：FPA具有一定的灵敏度和特异性，且操作简单、检测速度快，在布鲁氏菌病血清学检查中具备较高的应用价值。

关键词：荧光偏振法；布鲁氏菌；血清学检查

中图分类号：R516.7

布鲁氏菌病，又称布病或布鲁菌病，是一种由布鲁氏菌属细菌引起的人畜共患传染病。该病在全球范围内广泛分布，对人类健康和畜牧业发展构成严重威胁[1]。一般来说，布鲁氏菌病的形成主要源于布鲁氏菌的感染。这些细菌广泛存在于受感染的动物体内，如牛、羊、猪等家畜，以及鹿、骆驼等野生动物。人类通过直接接触病畜或其排泄物、分泌物，或食用未经充分加热处理的病畜肉类、奶制品等而感染。此外，布鲁氏菌还可通过气溶胶传播，如在屠宰场、皮毛加工厂等场所，细菌可随空气传播至人体呼吸道而致病。在该病的诊断上，常用血清学检查法。其中，FPA、RBT是两种较为有效的血清学检查方法[2]。FPA可以借助均相反应，对病菌进行荧光标记，由此支持在溶液状态下直接进行布鲁氏菌病血清学检查，这使得该方法能够实时监测抗原与抗体的结合过程，为动态观察免疫反应提供了可能，而且由于反应过程快速且稳定，FPA能够在较短时间内完成检测，提高了检测效率。此外，FPA不仅能够定性判断样本中是否存在特异性抗体，还能够通过测量荧光偏振值的变化进行定量分析。这种定量分析方法能够更准确地反映抗体水平的变化趋势和程度，为临床诊断和治疗提供更为精确的依据，同时由于荧光偏振信号稳定且不易受外界因素干扰，因此，检测结果具有较高的稳定性和可靠性。RBT则是采用经过特殊处理并标记有虎红染料的布鲁氏菌抗原，与布鲁氏菌抗原表面的特异性位点进行高亲和力结合，形成抗原-抗体复合物，为血清检查观测提供支持[3]。此外，RBT所需的试验工具较为简易，仅需要虎红抗原即可完成检测。这使得该方法具有较强的现场检测能力，可以在没有复杂实验室设备的条件下进行快速检测，这对于偏远地区或疫情现场的快速响应具有重要意义。在此背景下，本文为了进一步研究FPA在血清检查中的应用价值，以RBT检查作为对照，分析了布鲁氏菌病血清检查中，FPA的应用效果，希望能够为布鲁氏菌病检测提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

在2023年全年期间接受布鲁氏菌病血清学检查的人员共计244例资料，其中，男140例、女104例，年龄26～71岁，均值为（45.89±1.36）岁。在从事行业上，有56例为屠夫、31例为兽医、61例为皮毛加工工厂工人、96例为家畜饲养员。根据WS268-2007使用布鲁氏菌诊断标准，有139例为阳性、有105例为阴性。

1.2 方法

FPA血清学检查方法：1）准备工作：准备荧光偏振仪、离心机、旋涡混合器、微量移液器及吸头等，并做好荧光偏振仪的预热和校准。然后，打开荧光偏振仪配套的软件，根据实验需求设置检测参数，如波长、增益、检测时间等，再输入实验信息，如样本编号、检测日期、操作人员等；2）对照血清检测：先进行阳性对照血清和阴性对照血清的检测，以验证实验体系的稳定性和准确性，然后将对照血清稀释至适当浓度，加入反应体系中，与荧光标记抗原孵育，再使用荧光偏振仪检测对照血清的荧光偏振值，并记录结果；3）样品检测：将待检血清样本按照一定比例稀释后，加入反应体系中，与荧光标记抗原孵育。孵育结束后，使用缓冲液洗涤反应体系，去除未结合的荧光标记抗原。然后将洗涤后的反应体系置于荧光偏振仪上进行检测，记录各样本的荧光偏振值；4）结果判定：根据阳性对照血清和阴性对照血清的荧光偏振值，设定合理的判断阈值。然后将待检血清样本的荧光偏振值与判断阈值进行比较，高于阈值者判为阳性，低于阈值者判为阴性。在此过程中，需要注意区分弱阳性和假阳性结果，必要时可进行复检或结合其他诊断方法进行综合判断。

RBT血清学检查方法：1）准备材料与试剂：对虎红平板凝集抗原进行复溶或稀释，并准备一次性吸管或滴管用于加样，同时还要准备玻璃板或塑料板作为反应载体，需干净、无划痕。此外，还要用酒精棉球或消毒液，清洁操作区域和工具；2）试验环境设置：试验环境应清洁、明亮，避免阳光直射和强风干扰。室内温度应控制在适宜范围内，以确保抗原和血清的稳定性。此外，还要准备好操作台或实验桌，铺上干净的塑料布或纸巾，以防污染；3）试验操作：使用酒精棉球或消毒液擦拭玻璃板表面，确保无灰尘和残留物，然后使用一次性吸管或滴管吸取适量的虎红平板凝集抗原，滴加于玻璃板中央，形成一个小圆滴，再在抗原旁边滴加一滴待检血清。之后，使用无菌的搅拌针或牙签，轻轻地将血清与抗原混合，确保两者充分接触。注意避免产生气泡；4）结果判定：在混合后的1-4分钟内观察反应结果。如果出现可见的凝集颗粒或凝集块，则视为阳性反应；如果混合液保持均匀红色且无明显凝集现象，则视为阴性反应；如果混合液出现非特异性凝集、颜色变化异常或无法判断结果等情况，则视为无效试验，需重新进行检测。此外，还要注意，观察结果时应在指定时间内完成，避免超时导致假阳性或假阴性结果，同时对于疑似阳性或无效试验结果，应进行复检以确认诊断。

1.3 观察指标

灵敏度：描述了血清学检查方法检测出布鲁氏菌病人的能力，计算公式为：真阳性患者人数/（真阳性患者人数+假阳性患者人数）*100%。

特异性：描述了血清学检查方法检验出非布鲁氏菌病人的能力，计算公式为：真阴性患者人数/（假阳性患者人数+真阴性患者人数）*100%。

诊断效能：包含灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确性。其中，阳性预测值=真阳性例数/（真阳性例数+假阳性例数），即测试结果为阳性且实际患有疾病的情况；阴性预测值=真阴性/（真阴性+ 假阴性），即实际未患病且检测结果为阴性的人数；准确性= (真阳性例数 + 真阴性例数) ÷ (真阳性例数 + 假阴性例数 + 假阳性例数 + 真阴性例数)‌‌

1.4 统计学方法

使用SPSS26.0软件对上述两种血清学检查结果数据进行处理，输出的计数结果记录为n（%），χ2检验；输出的计量结果记录x²，t检验。P＜0.05，说明差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 FPA的灵敏度和特异性

根据FPA血清学检测结果如表1，可以得出FPA灵敏度为94.24%，特异性为95.24%。

表1  布鲁氏菌病FPA血清学检查结果表

2.2 RBT的灵敏度和特异性

根据RBT血清学检测结果如表2，可以得出RBT灵敏度为86.33%，特异性为83.81%。

表2  布鲁氏菌病RBT血清学检查结果表

2.3 FPA、RBT的灵敏度和特异性对比结果

结果显示，FPA的灵敏度和特异性更高（P＜0.05），如表3。

表3  FPA、RBT的灵敏度和特异性对比结果表

2.4FPA、RBT的诊断效能比较结果

结果显示，FPA法的各项诊断效能均优于RBT法（P＜0.05），如表4。

表4 FPA、RBT的诊断效能比较结果表

3 讨论

布鲁氏菌病是典型的人畜共患病，致病菌布鲁氏菌在自然界中存活能力强，且感染途径多样，容易在人群中传播，且该病的潜伏期长短不一，且病程往往较长，部分患者即使经过治疗也可能出现复发[4]。通常来说，布鲁氏菌病的症状一般可分为急性期、亚急性期和慢性期三个阶段。急性期主要表现为发热、多汗、乏力、关节疼痛等。发热多为不规则热，少数为波状热，体温可达39℃以上，持续数周至数月不等。多汗症状显著，尤以夜间为甚，可湿透衣被。关节疼痛多呈游走性，主要累及大关节，如膝、髋、肩等[5]。此外，患者还可能出现头痛、神经痛、淋巴结肿大等症状。亚急性期时，患者的症状会较急性期有所减轻，但仍可有低热、乏力、关节疼痛等表现。此期患者易忽视病情，导致病情迁延不愈。待到慢性期，患者则会表现出长期低热、多汗、乏力、关节疼痛及器官损害等。器官损害可累及多个系统，如神经系统、消化系统、骨关节系统等，让患者生活质量明显下降。就目前来看，由于布鲁氏菌对抗生素的敏感性差异较大，且易产生耐药性，导致其治疗难度较大，所以，需加强疾病的检测，以做好疾病的预防。在疾病诊断上，现阶段常用血清学检查。其中，FPA作为一种有效的血清学检查方法，其可以通过检测荧光标记抗原与血清中特异性抗体的结合程度，捕捉到微量的抗体存在，借此为疾病的诊断提供参考，而且操作步骤相对简单，只需将样品与试剂混合后置于荧光偏振仪上进行检测即可。这种简便的操作流程降低了对操作人员的技术要求，使得该方法易于在实验室中推广和应用。此外，RBT也是常见的血清学检查方法，其机理基于抗原与抗体的特异性结合以及随后产生的凝集反应，通过观察反应结果来判断待检样本中是否存在布鲁氏菌抗体。在血清学检查中，RBT所需的试剂和设备相对简单，成本较低，这使得该方法在资源有限或经济条件较差的地区也具有较高的推广应用价值，同时由于试剂价格不高，也降低了检测成本，有利于大规模筛查工作的开展。

基于此，本文围绕荧光偏振法的应用将虎红平板凝集试验法作为对照，进行了相关的研究分析。从数据统计结果上来看，以WS268-2007使用布鲁氏菌诊断标准作为金标准，FPA血清学检测的灵敏度为94.24%，特异性为95.24%，而RBT灵敏度为86.33%，特异性为83.81%，同时将上述两组数据进行对比，显示FPA血清学检测的灵敏度、特异性显著更高。而灵敏度反映了筛检试验发现病人的能力，灵敏度越高，漏诊率越低，特异度则指实际无病按该筛检标准被正确地判为无病的百分比，可以反映筛检试验确定非病人的能力特异度越高，误诊率越低，由此可见，荧光偏振法筛选确定布鲁氏菌病患者，以及非布鲁氏患者的能力较强，相较于虎红平板凝集试验法，其的漏诊率和误诊率更低。

从诊断效能上来看，除了灵敏度和特异度以外，数据结果显示，阳性预测值、阴性预测值，以及准确性，均为FPA法显著更高。而阳性预测值是指筛检试验检出的全部阳性例数中真正“有病”的例数所占的比例，反映了筛检试验结果阳性者患目标疾病的可能性，阳性预测值越高，说明测试结果的准确性越高，即阳性结果更有可能是真实的。而FPA法的阳性预测值更高，说明其相较于RBT法的阳性结果可信度更高，能够更好地支持医生做出准确的临床判断和决策。而阴性预测值则反应了阴性检测结果的可信度，该值越高，说明检测方法得出的阴性结果可信度越高。而FPA法的阴性预测值更高，说明其的阴性结果具有更高的可信度，这对于疾病诊断具有重要意义。在布鲁氏菌病的筛查过程中，FPA法得出的阴性结果，相较于RBT法，可以准确地帮助医生判断可以排除患病可能性的受试者，提高筛查工作效率，而且在治疗过程中，FPA法的阴性结果，也可以更好地用于评估治疗效果。如果治疗后患者的检测结果为阴性，且阴性预测值较高，那么可以认为患者已经康复或病情得到有效控制。

在诊断效能中，准确性这一指标能够衡量试验测量值与实际值相符合程度，可以反应检测结果的可靠性和实用性。而根据统计结果，FPA法的准确度更高，说明该方法得到的结果，可以更真实地反映受检者的患病情况。

一般来说，准确性会受到多种因素影响。其中，人的因素是影响各类检测结果准确性的重要因素之一，而FPA法的仪器可以自动进行数据处理，结合电子化结果判读方式，能够达到较高的客观性，减少了人为主观因素的影响，这在一定程度上，让此种方法的准确性更高。此外，该方法可以捕捉到极微小的荧光偏振变化，所以，能够在低浓度抗体的情况下，实现有效、灵敏的检测，极大地提高了此方法结果的可靠性，让其的诊断效能更高。

综上所述，在布鲁氏菌病血清学检查中，相较于RBT，FPA的灵敏度、特异性更高，以及诊断效能更优。

参考文献

[1]宋云林,鲁晓擘.布鲁氏菌病实验室诊断方法研究进展[J].中华实用诊断与治疗杂志,2024,38(04):428-432.

[2]冯璇,张哲林,石树君等.布鲁氏菌病实验室检测的研究进展[J].传染病信息,2023,36(05):469-472.

[3]侯淑芬,马丹丹,许少莉等.血培养联合血清学检验对布鲁氏菌感染诊断的价值分析[J].临床研究,2023,31(06):121-123.

[4]刘雅雯,王显军,杨丽萍.对比胶体金免疫层析法与荧光偏振法诊断布鲁氏菌病准确性的Meta分析[J].中国人兽共患病学报,2023,39(04):409-417.

[5]刘佳音,姜海,杨文杰.荧光偏振检测法在布鲁氏菌病诊断中的应用[J].疾病监测,2021,36(12):1248-1251.

作者简介：梁素娟（1978.05-），女，满族，河北承德人，本科学历，副主任医师，研究方向为地方病控制。