ATF4、VEGF在喉癌组织中的表达及其与肿瘤临床病理学因素相关性分析

【摘要】目的：探讨喉癌组织中转录激活因子4（ATF4）与血管内皮生长因子（VEGF）表达情况及同肿瘤临床病理特征相关性。方法：回顾性分析71例喉癌患者临床资料，收集患者癌灶组织与癌旁组织标本，通过免疫组化方法，对标本组织ATF4、VEGF阳性表达率进行对比，并且分析ATF4、VEGF表达同喉癌患者临床病理特征之间的关系。结果：相较于癌旁组织，喉癌患者癌灶组织的ATF4、VEGF阳性表达率明显更高，对比差异具有统计学意义（P＜0.05）。ATF4阳性表达率与喉癌患者肿瘤TNM分期（r=0.455，P=0.008）、分化程度（r=0.481，P=0.005）、淋巴结转移（r=0.502，P=0.003）均呈正相关（均P＜0.05）；VEGF阳性表达率与喉癌患者肿瘤TNM分期（r=0.388，P=0.021）、分化程度（r=0.402，P=0.017）均呈正相关（均P＜0.05）。结论：ATF4和VEGF在喉癌组织中显著高表达，且其表达水平与肿瘤恶性程度及转移密切相关，这些发现提示ATF4和VEGF共同参与喉癌的发生发展过程，为喉癌早期诊断及临床靶向治疗提供科学理论依据。

【关键词】喉癌；转录激活因子4；血管内皮生长因子；病理学因素；相关性

喉癌属于头颈部常见的一种恶性肿瘤，年发病率逐年升高，成为威胁人们生命安全的恶性肿瘤疾病之一[1]。当前，手术、放化疗等各种方式的广泛应用，为癌症疾病干预提供重要帮助，但是喉癌的早期诊断以及预后评估仍旧是现阶段面临的重大挑战。近年来，随着分子生物学的快速发展，相关标志物的检测为疾病早期检出提供重要帮助。转录激活因子4（ATF4）作为内质网应激反应中关键调控因子，主要参与细胞凋亡、自噬以及肿瘤微环境调控等诸多生物学过程[2]。在多种恶性肿瘤的发生发展中，ATF4表现为异常表达状态，且参与肿瘤侵袭以及转移途径。血管内皮生长因子（VEGF）在各种肿瘤发生以及发展过程起到重要作用，作为肿瘤血管核心调控因子，VEGF高表达促使肿瘤血管生成，提供肿瘤生长及转移良好条件。但是，对于喉癌疾病，ATF4与VEGF具体表达及同病理的关系尚未完全阐明[3]。基于此，本次研究选择确诊喉癌的71例患者作为研究对象，采取自身对照的方式，通过免疫组化方法探讨喉癌组织ATF4、VEGF表达情况，并且针对ATF4与VEGF表达同临床病理学因素之间的关系做进一步探讨，为疾病的治疗及预后评估提供重要理论参考依据，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究采用回顾性队列研究设计，系统分析2022年3月至2023年12月期间本院收治的71例喉癌病例的临床特征。病例入选严格遵循以下标准：所有入组病例均经病理学确诊，且符合CSCO喉癌诊疗指南（2023版）[4]的临床诊断规范；研究对象年龄范围限定于18-80周岁，临床病历资料完整无缺失；研究对象需具备良好的认知功能和语言交流能力。所有入选患者及其法定监护人均签署书面知情同意文件。病例排除标准包括：合并其他系统恶性肿瘤或活动性感染性疾病者；存在造血系统疾病或自身免疫性疾病病史者；以及患有严重精神障碍或认知功能缺陷者。入院收集患者基线资料，统计如下：男性63例，女性8例；年龄18～80岁，平均年龄（58.05±4.55）岁；国际肿瘤学会（TNM）分期：Ⅰ期患者10例，Ⅱ期患者28例，Ⅲ期患者25例，Ⅳ期患者8例；组织分化程度：低分化患者18例，中分化患者21例，高分化患者32例；淋巴结转移情况；有转移患者28例，无转移患者43例。本次研究经医院医学伦理委员会批准同意。

1.2 方法

1.2.1 标本获取方法

所有的喉癌患者，均采集患者癌灶组织与癌旁组织，进行样本采集时候，根据患者是否手术，选择不同的样本采集方式。接受手术治疗的患者，取手术实施过程的癌灶组织以及癌旁组织。而无法手术治疗患者则通过穿刺活检方式获得需要的组织样本。样本采集后均按照标准方式存储，方便进一步进行免疫组化检查，检测组织ATF4与VEGF表达情况。

1.2.2 免疫组化与结果判定

采用标准免疫组织化学技术对喉癌组织及癌旁组织进行处理分析。实验流程严格遵循以下步骤：组织标本经10%中性甲醛固定24小时后，依次进行梯度乙醇脱水、石蜡包埋及4μm连续切片制备。切片经二甲苯系列脱蜡处理后，采用反向梯度乙醇水化，PBS充分漂洗后行高压热诱导抗原修复。内源性过氧化物酶经3%H2O2封闭后，以山羊血清封闭非特异性结合位点，随后分别孵育ATF4、VEGF及D2-40一抗（4℃过夜）。次日经室温平衡后，应用HRP标记二抗孵育1小时，DAB显色系统进行特异性染色，苏木素复染后经梯度乙醇脱水透明，中性树胶封固。实验设立说明书推荐阳性对照及PBS替代一抗的阴性对照。

免疫组化结果采用半定量积分系统进行评估：阳性信号定义为胞质/胞膜出现黄色至棕褐色颗粒状沉积。于400倍视野下随机选取5个代表性区域，分别对染色强度（0-3分：无色至黄褐色）及阳性细胞百分比（0-4分：≤5%至＞75%）进行评分，两者乘积为最终得分（总分≥4分判读为阳性）。所有判读均由两名资深病理医师双盲复核确认。

1.3 观察指标

（1）ATF4、VEGF阳性表达。针对71例喉癌患者癌灶组织与癌旁组织的ATF4、VEGF阳性表达率进行对比。（2）ATF4、VEGF阳性表达同喉癌病理学因素关系。针对喉癌不同病理学类型的ATF4、VEGF阳性表达情况比较，分析相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0统计软件进行数据分析。计量资料采用均数±标准差（x̄±s）进行描述性统计，计数资料以频数和构成比（%）表示。组间比较采用独立样本t检验（计量资料）和卡方检验（计数资料），相关性分析Pearson法，结果以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 ATF4、VEGF阳性表达

71例喉癌患者，癌灶组织经免疫组化检测方法，检测ATF4、VEGF的阳性表达率分别为87.32%、91.55%，阳性表达率均明显比癌旁组织更高（P＜0.05），见表1。

表1 喉癌患者癌灶组织与癌旁组织的ATF4、VEGF阳性表达率对比[n（%）]

2.2 ATF4、VEGF阳性表达同喉癌病理学因素关系

ATF4阳性表达率与喉癌患者肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移均呈正相关（均P＜0.05）；VEGF阳性表达率与喉癌患者肿瘤TNM分期、分化程度均呈正相关（均P＜0.05），见表2。

表2 ATF4、VEGF阳性表达同喉癌病理学因素关系统计

3 讨论

喉癌的早期诊断以及合理治疗是提高患者生存质量，延长患者生存时间的关键[5]。因此，针对喉癌需要寻找灵敏度高的标志物来帮助疾病的早期识别，指导临床合理及个性化治疗，改善患者预后[6]。

本次研究探讨ATF4、VEGF表达同喉癌关系及临床病理特征相关性。结果显示相较于癌旁组织，癌灶组织的ATF4、VEGF阳性表达率明显更高，这一结果表明ATF4、VEGF表达同喉癌的相关性。分析原因主要是ATF4作为内质网应激反应的关键调控因子，通过增加谷氨酸转运蛋白表达，有效诱导肿瘤血管新生，这样为肿瘤细胞的发生以及发展提供重要营养条件[7]。而ATF4也可刺激VEGF的表达，而VEGF则诱导肿瘤新生血管的生成，相互作用为喉癌的发生以及持续发展提供有利基础，因此检测相关标志物就为喉癌早期识别提供帮助[8]。而相关性研究显示，喉癌患者癌灶组织ATF4表达同肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移相关，而VEGF表达同肿瘤分期、分化程度相关。这一结果主要是进一步解释ATF4、VEGF表达对于肿瘤病变程度以及转移与否的判定具有帮助，其中对于ATF4的多重线性相关性，表明该项指标基于整合内质网应激反应与上皮-间质转化（EMT）过程，在肿瘤侵袭转移中发挥枢纽作用，而指标同淋巴结转移的关系，也意味着ATF4参与调控肿瘤细胞的迁移侵袭能力[9]。而VEGF主要同血管生成相关肿瘤进展特征相关，但是同肿瘤转移并无显著关联，这也反映出ATF4、VEGF在肿瘤微环境作用靶点的差异，其中VEGF主要作用于血管内皮细胞促进血供，而ATF4主要是直接调控肿瘤细胞的恶性表型[10]。基于功能分工的差异，则能够为更好的理解喉癌异质性提供新视角及提供靶向治疗策略抉择的科学参考证据。

综上所述，ATF4、VEGF表达同喉癌存在很大关系，相关指标的检测也能够为病变严重程度以及转移等提供帮助，继而为疾病的防治以及治疗提供有价值的参考借鉴。

【参考文献】

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项目来源：河北省邢台市重点研发计划自筹项目（2023ZC182