喉癌患者ATF4、VEGF表达水平与临床意义

【摘要】目的：探讨喉癌患者激活转录因子4（ATF4）、血管内皮生长因子（VEGF）表达水平及临床意义。方法：选择60例喉癌患者为喉癌组，同期手术治疗非喉癌者60例为非喉癌组。喉癌组患者采集癌灶组织与癌旁健康组织，非喉癌组则采取病灶组织。采取免疫组化分析方式，检测组织ATF4、VEGF阳性表达情况。对比各组患者阳性表达情况，不同肿瘤分期以及肿瘤转移的阳性表达情况，分析ATF4、VEGF阳性表达同喉癌肿瘤分期与肿瘤转移的相关性。结果：喉癌组织中ATF4和VEGF阳性表达率分别为75.00%和83.33%，显著高于健康组织和非喉癌组织（P＜0.05）。不同肿瘤分期患者的ATF4、VEGF表达差异显著（P＜0.05）。有转移癌灶的ATF4表达率显著高于无转移者（P＜0.05），但VEGF表达无此差异（P＞0.05）。相关性分析表明，ATF4表达与肿瘤分期（r=0.523）和转移（r=0.482）均呈正相关（均P＜0.001），而VEGF仅与肿瘤分期相关（r=0.477，P＜0.05）。结论：喉癌组织中ATF4、VEGF表达明显升高，检测指标对于疾病的早期诊断、病理分期判定、肿瘤转移等具有重要帮助，值得推广应用。

【关键词】喉癌；激活转录因子4；血管内皮生长因子；阳性表达率；相关性

喉癌是一种起源喉部黏膜上皮常见头颈部恶性肿瘤，该病具有侵袭性强、淋巴结转移率高等典型特征。根据临床统计数据，30%-40%的喉癌患者确诊时伴颈部淋巴结转移，而中晚期的比例也较高[1]。在喉癌的治疗上，不同分期的患者治疗方式也存在差异，主要是对于Ⅰ-Ⅱ期的早期喉癌患者，临床中多是应用保留喉功能的手术或者放化疗治疗方法，而对于Ⅰ-Ⅱ期Ⅲ-Ⅳ期的中晚期喉癌患者，通常需采取放化疗或者靶向治疗的方法，而且不同分期患者5年生存率也存在很大差异，因此针对喉癌患者早期诊断以及治疗具有重要的意义[2]。常规的影像学检查方法如CT检查、MRI检查虽说能取得一定效果，但是影像检查对微小病灶以及肿瘤转移风险评估上存在灵敏度及准确度差的局限性，实际中迫切需要选择更加可靠的分子标志物辅助疾病的诊疗以及预后评估[3]。激活转录因子4（ATF4）是线粒体应激调控的关键基因，参与抗氧化反应、自噬、氨基酸生物合成以及转运基因转录，多种类型肿瘤均依赖同ATF4相关应激反应生存。血管内皮生长因子（VEGF）属于肿瘤血管生成核心调控分子，VEGF过表达通常同肿瘤侵袭转移[4]。ATF4和VEGF在多种恶性肿瘤中异常表达，但在喉癌中的表达特征及其临床关联性研究仍存在样本量不足、分期分析不系统等局限。基于此，本研究通过检测60例喉癌患者与手术治疗的非喉癌患者组织中ATF4和VEGF的表达水平，分析指标检测的意义，为喉癌的临床诊疗提供重要理论依据，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究选择回顾性分析方法，选择2023年1月-2025年1月就诊治疗的60例喉癌患者以及60例院内行喉部手术治疗的非喉癌患者为研究对象，分别为喉癌组、非喉癌组。纳入标准：喉癌患者均经病理组织学证实，非喉癌的患者也经手术明确未见肿瘤病变；患者年龄在18～70岁之间，临床资料完整；标本按照规范穿刺或者手术获取组织检查；患者及其家属均对研究知情同意并签署同意书。排除标准：合并其他类型恶性肿瘤疾病患者；全身感染或者血液疾病患者；年龄＜18岁或者＞70岁的患者；病理标本未按规范选择或者出现标本污染情况者。

1.2 方法

1.2.1 基线资料收集

收集患者基线资料，包括性别、年龄、国际肿瘤学会（TNM）分期、肿瘤转移。

1.2.2 标本选取

喉癌组的标本选取上，选择癌灶组织、癌旁健康组织，主要是针对采取手术治疗患者通过直接切除组织的方式。而对于无手术指征的中晚期喉癌患者，采取穿刺活检区病理组织与癌旁健康组织的方式。非喉癌组同样是手术过程获取病变部位组织。针对获取的标本组织，均是通过中性甲醛固定处理，之后通过乙醇梯度脱水处理，借助组织包埋机予以石蜡包埋处理。脱蜡水化之后37℃条件下持续孵育20min，予以抗原修复及封闭液处理。滴加Anti-ATF4抗体（苏州瑞诺德生物科技有限公司）、Anti-VEGF抗体（上海冠导生物工程有限公司），之后在24h加入二抗并在37℃条件孵育30min，显色、苏木精染色、脱水、透明、固定，最终则是镜下观察染色的结果。

阳性细胞率：＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，＞50%为3分。

染色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。

总分=阳性率×强度，≤3分为低表达，＞3分为高表达。

1.3 观察指标

（1）ATF4、VEGF表达情况。针对喉癌组癌灶组织、癌旁健康组织与非喉癌组病变组织的ATF4、VEGF阳性表达情况进行比较。并对比喉癌不同病理分期的ATF4、VEGF阳性表达差异。对比喉癌有无转移者的ATF4、VEGF阳性表达差异。（2）相关性分析。分析ATF4、VEGF表达同喉癌病理分期与转移相关性，评价指标检测对喉癌诊断的意义。

1.4 统计学方法

本研究结果采取SPSS25.0软件进行分析，计量资料采取（x̄±s）表示，组间对比采取t检验，计数资料采取[n（%）]表示，组间对比采取卡方检验。相关性分析采取Pearson法进行分析，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基线资料

60例喉癌组患者基线资料：男53例（88.33%），女7例（11.67%）。年龄20～70岁，平均年龄（48.11±3.41）岁。TNM分期：Ⅰ期8例（13.33%），Ⅱ期27例（45.00%），Ⅲ期20例（33.33%），Ⅳ期5例（8.33%）。肿瘤转移：转移13例（21.67%），无转移47例（78.33%）。60例非喉癌组患者基线资料：男54例（90.00%），女6例（10.00%）。年龄18～69岁，平均（47.89±3.39）岁。两组在性别与年龄资料对比，组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 喉癌组织、健康组织、非喉癌组织中ATF4与VEGF表达

不同组织的阳性表达情况上，喉癌组织ATF4阳性表达率为75.00%，VEGF阳性表达率为83.33%，两种阳性表达率均高于健康组织与非喉癌组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）。健康组织与非喉癌组织的ATF4、VEGF阳性表达情况对比，组间差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 不同组织ATF4与VEGF表达情况比较[n（%）]

注：与健康组织比较，*P＜0.05；与非喉癌组织比较，#P＜0.05。

2.3 不同肿瘤分期、转移的喉癌者癌灶组织ATF4与VEGF表达

ATF4、VEGF阳性表达率在不同肿瘤分期癌灶组织中比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；有肿瘤转移的癌灶组织ATF4阳性表达率高于无转移的癌灶组织（P＜0.05），有肿瘤转移的癌灶组织VEGF阳性表达率同无转移的癌灶组织对比差异无统计学意义（P＞0.05），详见表2。

表2 不同类型喉癌病灶组织ATF4与VEGF表达情况对比[n（%）]

2.4 ATF4、VEGF表达与喉癌肿瘤分期与转移的相关性

Pearson相关性分析表明，喉癌患者癌灶组织ATF4阳性表达表达同肿瘤分期、转移均呈正相关（r=0.523,0.482，均P＜0.001）。癌灶组织ATF4阳性表达同肿瘤分期呈正相关（r=0.477，P＜0.05），ATF4阳性表达同肿瘤转移无相关性（r=0.231，P=0.184）。

3 讨论

喉部属于呼吸系统重要组成，属于人类发音的主要器官。受不良饮食习惯、吸烟等诸多因素影响，疾病发病率呈逐年升高趋势[5]。早期喉癌可通过手术方式治疗取得良好效果及预后，而实际中大多数患者一旦确诊处在中晚期阶段，患者失去手术治疗的实际，因此探讨疾病早期诊断方式依旧重要。

分子生物学研究不断发展，基于分子水平探讨喉癌早期诊断及治疗成为重要的方法。ATF4作为转录活性因子家族重要成员，正常情况细胞蛋白质在内质网加工与折叠，形成正常结构的蛋白质[6]。而在肿瘤致病因素下，引起蛋白质加工障碍，蛋白质无法正常折叠，使得蛋白结构异常，如此引起肿瘤发生及发展。黄金樵等[7]的研究显示，复发转移患者ATF4水平明显更高，说明ATF4也参与肿瘤后续发展过程。VEGF为促进血管生成与淋巴管生成的重要分子，在乳腺癌、肺癌、胃癌等常见肿瘤组织中表现异常高表达情况。卿丽芝等[8]研究显示，早期声门型喉癌患者表达水平高，经过治疗后VEGF表达水平降低，也反映VEGF可作为喉癌治疗效果评估的重要指标。本次研究结果显示，相较于癌旁健康组织与非喉癌病变组织，喉癌患者癌灶组织ATF4、VEGF阳性表达率明显更高，表明ATF4、VEGF作为早期诊断喉癌指标是具有较高的可行性。

研究结果显示，不同肿瘤分期上，表现出ATF4、VEGF阳性表达率的差异。而肿瘤转移情况，显示ATF4同转移相关，肿瘤转移与否的喉癌癌灶组织VEGF阳性表达率未见差异，并且相关性分析也证实这个结果。这一结果表明随着肿瘤恶性程度的增加，内质网应激反应和血管生成过程被持续激活，导致ATF4、VEGF两个标志物的表达水平逐步升高[9]。而在肿瘤转移特征上，ATF4表达与转移状态显著相关，可能因为ATF4作为内质网应激的关键转录因子，能够通过调控上皮-间质转化（EMT）相关通路促进肿瘤细胞的侵袭转移能力[10]。相比之下，VEGF表达与转移状态无显著相关性，可能由于血管生成虽然是肿瘤转移的必要条件，但在转移过程中并非限速步骤，转移灶的形成通常更依赖于其他生物学过程而非单纯的血管生成。

综上所述，对于喉癌患者检测ATF4、VEGF表达情况，能够为疾病早期诊断、分期判定以及是否转移等的评估提供重要参考依据。

【参考文献】

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项目来源：河北省邢台市重点研发计划自筹项目（2023ZC182）