肠癌免疫组化微卫星四项MLH1,MSH2,MSH6,PMS2及Her-2的研究与指导治疗

【摘要】目的：探讨肠癌患者免疫组化微卫星四项（MLH1、MSH2、MSH6、PMS2）及Her-2的表达情况，并分析其对临床治疗的指导意义。方法：选取2022年1月至2023年12月期间80例肠癌患者，采用免疫组化法检测肿瘤组织中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2及Her-2的表达情况，结合患者临床资料进行分析。结果：80例患者中，微卫星稳定（MSS）型占72.50%，微卫星不稳定（MSI）型占27.50%；Her-2阳性表达率为15.00%。MSI型患者对免疫治疗反应较好，而Her-2阳性患者对靶向治疗有一定敏感性。结论：免疫组化检测MLH1、MSH2、MSH6、PMS2及Her-2的表达情况，可为肠癌患者的个体化治疗提供重要依据，有助于提高治疗效果，改善患者预后。

关键词：肠癌；免疫组化；微卫星四项；Her-2；个体化治疗

前言：肠癌作为全球范围内常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均呈上升趋势，严重威胁着人类的健康[1]。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，对肠癌发生、发展机制的研究日益深入，为肠癌的精准治疗提供了新的思路和方法[2]。微卫星不稳定是肠癌发生发展中的一个重要分子事件，其与错配修复基因的功能异常密切相关。MLH1、MSH2、MSH6、PMS2是MMR基因编码的主要蛋白，其表达异常可导致MSI的发生，进而影响肠癌的生物学行为和预后[3]。此外，Her-2作为一种重要的肿瘤相关基因，在多种肿瘤中过表达，与肿瘤的侵袭、转移和预后密切相关。本研究旨在通过对80例肠癌患者免疫组化微卫星四项及Her-2的研究，探讨其与临床病理特征的关系及对治疗的指导意义，为肠癌的精准治疗提供理论依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2023年1月至2024年12月期间在本院就诊的80例肠癌患者作为研究对象。纳入标准：经病理学检查确诊为肠癌；临床资料完整；患者及其家属知情同意并签署知情同意书。排除标准：合并其他恶性肿瘤；合并严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍；既往接受过抗肿瘤治疗。

1.2方法

1.2.1标本采集与处理

所有患者均行手术切除肿瘤组织，取肿瘤组织标本及距肿瘤边缘5 cm以上的正常肠黏膜组织标本，经10%中性福尔马林固定，常规脱水、透明、浸蜡、包埋，制成4μm厚切片，用于免疫组化染色。

1.2.2免疫组化染色

采用免疫组化法检测肿瘤组织中MLH1，MSH2，MSH6，PMS2及Her-2的表达情况。具体步骤如下：取肿瘤组织石蜡切片，经脱蜡、水化后，采用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复；滴加一抗（MLH1，MSH2，MSH6，PMS2，Her-2），4℃孵育过夜；次日，PBS冲洗后，滴加二抗，37℃孵育30分钟；DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。显微镜下观察，以细胞核或细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性表达。

1.2.3结果判定

MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白表达定位于细胞核，以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性表达。每张切片随机选取5个高倍视野（×400），计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞所占百分比。阳性细胞数≥10%为阳性表达，<10%为阴性表达。Her-2蛋白表达定位于细胞膜，以细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性表达。根据Her-2免疫组化染色结果，将其分为0、1+、2+、3+四个等级。0、1+为阴性表达，2+需进一步行荧光原位杂交（FISH）检测，3+为阳性表达。

1.3观察指标

观察肿瘤组织中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2及Her-2的表达情况，并分析其与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、病理类型、分化程度、TNM分期等临床病理特征的关系。

1.4统计学方法

采用SPSS 26.0统计学软件进行数据分析。计数资料以率（%）表示，采用χ²检验；计量资料以（）表示，采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1微卫星四项及Her-2的表达情况

80例肠癌患者中，MLH1阳性表达率为78.75%（63/80），MSH2阳性表达率为80.00%（64/80），MSH6阳性表达率为81.25%（65/80），PMS2阳性表达率为77.50%（62/80）。其中，四种蛋白均阳性表达（微卫星稳定，MSS）者58例，占72.50%；至少一种蛋白阴性表达（微卫星不稳定，MSI）者22例，占27.50%。Her-2阳性表达率为15.00%（12/80）。

2.2微卫星四项及Her-2表达与临床病理特征的关系

2.2.1微卫星四项表达与临床病理特征的关系

MSI型患者中，右半结肠癌、肿瘤直径≥5 cm、黏液腺癌、低分化及TNM分期Ⅲ—Ⅳ期的占比均高于MSS型患者（P<0.05）。

表1微卫星四项表达与临床病理特征的关系（例，%）

2.2.2 Her-2表达与临床病理特征的关系

Her-2阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、病理类型、分化程度均无相关性（P>0.05）；Her-2阳性表达患者TNM分期为Ⅲ—Ⅳ期的比例高于Her-2阴性表达患者（P<0.05）。

表2 Her-2表达与临床病理特征的关系（例，%）

3讨论

肠癌的发生发展是一个多因素、多步骤的复杂过程，涉及多种基因的突变和表达异常。微卫星是基因组中广泛分布的短串联重复序列，具有高度多态性。在DNA复制过程中，由于DNA聚合酶的滑动等原因，微卫星序列容易发生插入或缺失突变，导致微卫星不稳定性[4]。MMR基因是细胞内负责纠正DNA复制错误的基因，其编码的蛋白包括MLH1、MSH2、MSH6、PMS2等。当MMR基因发生突变或甲基化等异常时，会导致MMR蛋白功能缺陷，无法纠正微卫星序列的复制错误，从而引起MSI。MSI是肠癌发生发展中的一个重要分子事件，与肠癌的预后、治疗反应等密切相关。Her-2作为表皮生长因子受体家族的重要成员，其过表达可激活下游信号通路，促进细胞增殖、抑制凋亡、增强侵袭及转移能力，与肠癌的恶性程度及预后密切相关[5]。

本研究结果显示，MSI型患者中，右半结肠癌、肿瘤直径≥5 cm、病理类型为黏液腺癌、低分化、TNM分期为Ⅲ—Ⅳ期的比例均高于MSS型患者，提示MSI型肠癌具有更强的侵袭性和转移能力，预后较差。Her-2阳性表达患者TNM分期为Ⅲ—Ⅳ期的比例高于Her-2阴性表达患者，提示Her-2阳性表达可能与肠癌的进展和预后不良相关。

综上所述，免疫组化检测MLH1、MSH2、MSH6、PMS2及Her-2的表达情况，可为肠癌患者的个体化治疗提供重要依据，有助于提高治疗效果，改善患者预后。

参考文献

[1]潘思琼,陆奉科,李山.错配修复蛋白MLH1、MSH2、PMS2、MSH6及p53在结直肠癌中的表达及意义[J].海南医学,2021,32(1):4-7.

[2]王学艳.结直肠癌患者PMS2、MSH6、MLH1、MSH2的表达水平及临床意义[J].现代诊断与治疗,2024,35(16):2481-2483.

[3]王智杰,柏愚.《中国结直肠癌癌前病变和癌前状态处理策略专家共识》解读[J].中华消化内镜杂志,2022,39(1):35-38.

[4]徐燕,雷俊平,尚松,蔺兵虎.结直肠癌中错配修复蛋白MLH1、PMS2、MSH2、MSH6和Ki-67表达的意义及与预后的关系[J].广东医学,2023,44(1):90-95.

[5]樊秀双.错配修复蛋白MLH1、PMS2、MSH2、MSH6在结直肠癌中的表达及临床意义[J].现代诊断与治疗,2022,33(12):1834-1837.