感冒清热颗粒的质量控制研究

 中文摘要：目的：研究感冒清热颗粒的质量控制。方法：将原标准中有毒性的溶剂替换成无毒或低毒性的溶剂，对苦地丁、防风进行薄层色谱鉴别，优选苦杏仁苷供试品溶液的制备方法，采用HPLC法测定苦杏仁苷的含量。结果：苦地丁、防风薄层鉴别中溶剂替换后与对照品在相应位置显相同颜色的斑点；苦杏仁苷在0.0626μg～1.252μg范围内呈良好的线性关系。结论：苦地丁、防风薄层鉴别中溶剂替换后的方法重现性好，HPLC法测苦杏仁苷含量的方法专属性强，重复性好。

关键词：感冒清热颗粒；薄层色谱；含量测定；苦杏仁苷

感冒清热颗粒由防风、柴胡、苦杏仁、苦地丁等11味中药组成的复方制剂，其功能为疏风散寒，解表清热，现行质量标准只对葛根素进行含量测定[1]，有文献[2] 报道感冒清热颗粒荆芥穗、薄荷中总胡薄荷酮的含量测定，但苦杏仁苷的含量测定未见文献报道，方中苦杏仁降气止咳平喘，苦杏仁苷是苦杏仁的主要指标成分，为能有效控制制剂中苦杏仁苷的含量，保证临床疗效，对苦杏仁的含量测定方法进行研究；另外将制剂中的苦地丁、防风薄层鉴别方法中使用到的有毒性的试剂根据介电常数替换为无毒或低毒性的试剂，使该制剂的质量标准更加完善，实验方法如下：

1仪器与材料

1.1仪器

戴安Ultimate-3000（双泵）高效液相色谱仪；戴安Ultimate-3000检测器；色谱工作站（chromeleon）；色谱柱；超声波清洗器；紫外反射透射仪；薄层色谱成像系统；硅胶G薄层板和硅胶G254 薄层板。

1.2药品与试剂

感冒清热颗粒（批号：2301801、2301802、2301803）；苦杏仁苷对照品；升麻素苷对照品；5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品；防风对照药材；苦地丁对照药材；甲醇（色谱纯），高纯水，磷酸，二氯甲烷，三氯甲烷，氨水，甲苯，乙醚，改良碘化铋钾试液，乙醇，甲醇。未标注的试剂均为分析纯。

2薄层鉴别

2.1 苦地丁的薄层鉴别

2.1.1药典规定方法：取本品6g研细加50ml水溶解，加浓氨试液调节PH值至12，三氯甲烷振摇提取2次，每次25ml，分取三氯甲烷层，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。取苦地丁对照药材1g加50ml水，超声处理10分钟滤过，滤同上调节PH值至12，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，取上述两种溶液各10μl治愈同一硅胶G薄层板上，将苯-乙醚-二氯甲烷作为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。

2.1.2改良后方法：将2.2.1供试品溶液制备中的三氯甲烷替换为二氯甲烷，展开剂替换为甲苯-乙醚-二氯甲烷，其他条件均不改变。见图2。

1  2  3                         1   2  3

1：供试品溶液1                 1：供试品溶液1   

2：苦地丁对照药材               2：苦地丁对照药材

3：供试品溶液2                 3：供试品溶液2

         图1                             图2

2.1.3结论：药典规定的方法（图1）和改良后的方法（图2）效果一致，因二氯甲烷的毒性小于三氯甲烷，故改良后的方法更具有实用性。

2.2 防风的薄层鉴别

2.2.1药典规定方法：取防风对照药材1g加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。另取升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。取供试品8μl、2μl，以三氯甲烷-甲醇为展开剂同2.1.1开展薄层色谱法试验。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图3。

2.2.2改良后方法：将2.3.1中展开剂替换为二氯甲烷-甲醇，其他条件均不改变，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图4。

          1   2  3  4   5                     1  2 3  4 5

1：供试品溶液1                          1：供试品溶液1

2：防风对照药材                          2：防风对照药材

3：升麻素苷                              3：升麻素苷

4：5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品            4：5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品

5：供试品溶液2                          5：供试品溶液2

                图3                             图4

2.2.3结论：药典规定的方法（图5）和改良后的方法（图6）效果一致，故改良后的方法更具有实用性。

3含量测定

3.1色谱条件与系统适用性试验

图5表明苦杏仁苷色谱峰分离良好，且本品中其它药材对苦杏仁苷的测定无干扰。

a- 苦杏仁苷对照品

                         b-阴性对照

b- 

阴性对照

 c-样品

图5  HPLC色谱图

3.2溶液的制备

3.2.1 对照品溶液的制备[1]

取苦杏仁苷对照品3.13mg置50ml容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

3.2.2供试品溶液的制备[1]

    15g本品粉末置具塞锥形瓶中加甲醇50ml，超声处理30分钟放冷，称重后甲醇补足，摇匀过滤。取10ml置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液。

3.2.3 阴性对照液的制备[4]

取处方组成中除苦杏仁外的其余药味，按 3.2.2制备方法制成阴性样品溶液。

3.3线性关系的考察[4,5]

苦杏仁苷在0.0626μg～1.252μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。结果见表1，图6。

表1苦杏仁苷的线性关系考察（n=2）

                            图6 苦杏仁苷的线性关系图

 3.4精密度试验[4,5]

同一份供试品溶液连续进样5次，苦杏仁苷峰面积RSD为0.72%，仪器精密度良好。结果见表2。

表2苦杏仁苷的精密度试验

 3.5稳定性试验[4,5]

同一份供试品溶液分别于0h、4h、8h、12h进样分析，苦杏仁苷峰面积RSD为2.36%，供试品溶液在12h内稳定性良好。结果见表3。

 表3苦杏仁苷的稳定性试验（n=2）

 3.6 重复性试验[4,5]

制备5份供试品溶液，进样分析，苦杏仁苷峰面积RSD为1.53%，分析方法重复性良好。结果见表4。

表4苦杏仁苷的重复性试验

3.7加样回收试验[4,5]

制备5份供试品溶液，加入相应量的苦杏仁苷对照品，进样分析，计算回收率，结果见表5。苦杏仁苷的平均回收率为96.65%，RSD =1.04%。结果表明本方法准确可靠。

表5苦杏仁苷的回收率试验结果

 3.8 样品含量测定[4,5]

制备3份供试品溶液，进样分析，计算苦杏仁苷的含量，结果见表6。  

表6样品含量测定结果

 4讨论

4.1 供试品的提取方法  本文配制供试品时取了15g感冒清热颗粒粉末，溶解在50ml 的50%甲醇溶液中，溶解时溶液成流体状，后来考虑到是否提取完全，取了1.5g粉末按原来的提取方法提取进样，结果显示含量缩小了十倍，由此说明15g粉末溶解在50ml 的50%甲醇溶液中溶解完全。100%甲醇提取时出现目标峰不对称度大、展宽等现象，80%甲醇作为溶剂时出现目标峰前延；经过试验确定采用50 %甲醇作为提取溶剂。

4.2 流动相的选择  本品是由11味中药组成的复方制剂 曾用乙腈-0.1%磷酸溶液(8∶92)[3]，甲醇-0.1%磷酸(15：85) [3]，甲醇－0.1%磷酸溶液( 25∶75)[4]等。经过试验，用甲醇-0.1%磷酸溶液(10：90)作为本品的流动相时，理论塔板数较高，保留时间适宜，效果较好。

5总结

    通过对感冒清热颗粒中苦地丁、防风的薄层色谱鉴别方法中将有毒性溶剂替换为无毒或低毒性溶剂试验的研究，得出苦地丁和防风的分离效果与《药典》规定的方法基本一致，而使用溶剂的毒性较低，能够更有效地保障实验人员的安全，具有推广应用价值。通过上述实验，初步暂定感冒清热颗粒中苦杏仁苷的含量应不低于0.90‰。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部 )[S].北京:中国医药科技出版社,2010:187-188,1195-1196.

[2] 刘兰军,宋伟峰. RP-HPLC法测定感冒清热颗粒荆芥穗、薄荷中总胡薄荷酮的含量[J].药品鉴定,2011,8(20):94-95.

[3] 葛 新.感冒清热颗粒薄层鉴别研究[J].实用中西医结合临床,2005,5(1):67-68.

[4] 李焕丹,陈哲琼,宋粉云,等.HPLC法测定小儿清热止咳口服液中苦杏仁苷的含量[J].齐鲁药事,2011,30(9):503.

[5] 马 玲,陈师农,张 毅,等.藿朴抗病毒胶囊中苦杏仁苷含量的高效液相色谱测定[J].时珍国医国药，2012,23(3):614-615.

第一作者：吴义兵，男，汉族 单位：合肥华润神鹿药业有限公司 邮编：231202 籍贯：安徽桐城 出生年月:1981年1月 研究方向：中成药生产 职称：中级