直接化学发光法、酶联免疫吸附法应用于乙型病毒性肝炎诊断的对比研究

【摘要】目的：研究对比直接化学发光法、酶联免疫吸附法应用于乙型病毒性肝炎诊断价值。方法：选择我院2023年1月至2023年12月期间收治的120例疑似乙型病毒性肝炎患者，均采集外周空腹静脉血采用直接化学发光法、酶联免疫吸附法进行实验室检查，就两种检验方式的检验结果与诊断效能、血清标志物阳性率进行对比。结果：直接化学发光法在乙肝诊断中的灵敏度与准确性高于酶联免疫吸附法，差异有统计学意义（P＜0.05）。两种检验方法中HbsAb、HbcAb阳性率对比差异无统计学意义（P＞0.05），直接化学发光法在HbeAg、HbsAg、HbeAb的阳性率高于酶联免疫吸附法，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：直接化学发光法、酶联免疫吸附法应用于乙型病毒性肝炎诊断中，前者具有更高的灵敏度与准确性，可以为临床诊疗提供更为准确的参考。

【关键词】乙型病毒性肝炎；直接化学发光法；酶联免疫吸附法；诊断效能

乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B）简称乙肝，与乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）侵袭肝脏引起的一系列病变为主要特点，是全球范围内最为常见的传染病之一[1]。我国HBV感染者约7000万例，其中约有2000万~3000万例的乙肝患者，乙肝的危害主要在慢性进展导致的肝硬化与肝癌，我国每年约有30万人死于乙肝相关肝硬化、肝癌[2][3]。乙肝患者主要以乏力、食欲减退、恶心呕吐为主要特点，部分患者会出现黄疸、发热情况[4]，病变早期因症状不典型确诊率较低。乙肝患者病情未及时有效发现，会增加病情迁延风险，增加肝硬化与肝癌的发生率，同时病情未予以及时有效控制时发展为重型肝炎的风险较高。早期明确诊断是开展早期针对性干预的关键[5]。乙肝的诊断有赖于临床症状体征评估、实验室检查等，结合流行病学进行综合分析，其中实验室检查方式主要为肝脏生化检查，如血清胆红素、乙型肝炎病毒标志物、HBV-DNA等[6][7]。直接化学发光法、酶联免疫吸附法是乙肝诊断中的常用检验方式，酶联免疫吸附法是基于酶分子与抗体或抗体分子共价结合原理的检测方法，在乙肝诊断中应用广泛。直接化学发光为免疫测定技术，将化学发光测定技术（高灵敏度）与免疫反应（高特异度）相结合，能够有效进行相应抗原、半抗原、抗体、脂肪酸等的检测，是近年来医学领域应用逐步增多的免疫测定技术手段[8]。该检测技术可以迅速进行乙肝病毒的抗体、抗原检测，具有较高的准确性。本研究结合部分疑似病例资料，就这两种方式在本病患者诊断中的价值进行对比分析。

1资料与方法

1.1一般资料

选择我院2023年1月至2023年12月期间收治的120例疑似乙型病毒性肝炎患者，男性71例，女性49例，年龄24~67（45.29±8.72）岁。纳入标准：（1）初步诊断疑似乙肝有待进一步检查明确诊断者；（2）于院内接受系统检查与治疗，各项资料完整者；（3）既往无肝病史；（4）除肝脏以外重要脏器功能正常。排除标准：（1）合并恶性病变者；（2）合并严重消化系统病变，如消化性溃疡、消化道穿孔等；（3）精神障碍者；（4）伴乙肝以外传染病者。

1.2方法

血液样本采集：均在晨起空腹（空腹时间＞8h）的状态下进行采血，选择外周静脉血，5ml/例，于37℃条件下离心处理分离血清冷冻保存备检，离心处理参数为3500r/min，时间10min。

直接化学发光法检验：采用迈克（maccura）i3000直接化学发光仪进行检验与配套试剂进行检验，第一步，将样本和包被抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的免疫磁微粒混合，样本中的HBsAg与抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体结合，形成抗原抗体复合物;第二步，洗涤后加入吖啶酯标记的抗乙型肝炎病毒表面抗原多克隆抗体，形成抗体-抗原-抗体免疫复合物;再次洗涤，加入底物液发生化学发光反应，测量相对发光值（RLU），相对发光值与样本中HBsAg的含量呈正比例关系。

酶联免疫吸附法检验：加样：将包被有HBsAb的微孔板条固定于板架上。每孔加入待测标本100ul，设阴、阳对照各2孔，设定质控孔2孔,分别加入100ul的量。加酶：每孔加入酶结合物50ul（1滴），充分混匀，封板。温育：充分混匀，37℃孵育30分钟。洗涤：洗板机洗板，扣干。加入显色剂，密封放在水浴箱内显色15分钟，加入终止液，利用汇松580酶标仪读板。

1.3观察指标

检验结果与诊断效能分析：参照荧光定量聚合酶链反应法检测结果，就直接化学发光法、酶联免疫吸附法的检测结果进行分析，并就其在乙肝诊断中的特异度、灵敏度、准确性等进行对比分析。

血清标志物阳性率统计：就直接化学发光法、酶联免疫吸附法两种检验方法中乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗体（HBeAb）、核心抗体（HBcAb）等血清标志物的阳性率进行统计对比。

1.4统计学方法：

采用SPSS23.0统计学软件处理，计量资料用（x±s）

表示，比较采用t检验，计数资料用百分比表示，比较采用c2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1直接化学发光法、酶联免疫吸附法检验结果与诊断效能分析

荧光定量聚合酶链反应法检测结果显示120例疑似病例中阳性病例80例，阴性病例40例。直接化学发光法检验显示阳性病例77例，阴性病例43例，酶联免疫吸附法检验显示阳性病例67例，阴性病例53例，具体见表1。诊断效能对比研究，直接化学发光法在乙肝诊断中的灵敏度与准确性高于酶联免疫吸附法，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表 1  本组 120例疑似病例检验结果分析（单位：例）

2.2 直接化学发光法、酶联免疫吸附法检验血清 标志物阳性率对比

两种检验方法中HbsAb、HbcAb阳性率对比差异

无统计学意义（P＞0.05），直接化学发光法在HbeAg、HbsAg、HbeAb的阳性率高于酶联免疫吸附法，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3  直接化学发光法、酶联免疫吸附法血清标志物阳性率对比（例 %)

3讨论

乙肝是全球流行性病毒感染性疾病，我国本病的发病率较高。1992年我党及政府将乙肝疫苗纳入儿童计划免疫管理，在2002年将乙肝疫苗纳入国家免疫规划[9]，有效遏制了我国乙肝的高发趋势，同时大大降低了1-4岁儿童乙肝病毒表面抗原（HBsAg）携带率。日常生活接触是乙肝传播的主要途径，如接触乙肝患者或病毒携带者的血液、唾液、乳汁等，母婴传播是乙肝传播的主要方式[10]，多于围生期发生，孕期母体HBV-DNA定量越高[11]，发生母婴传播的风险也越高。

本研究对比分析了直接化学发光法、酶联免疫吸附法应用于乙型病毒性肝炎诊断效果，显示直接化学发光法在乙肝诊断中的灵敏度与准确性高于酶联免疫吸附法，同时直接化学发光法在HbeAg、HbsAg、HbeAb的阳性率高于酶联免疫吸附法。乙肝两对半是医疗机构常用的HBV感染检测血清标志物，是分析判断检验对象是否具备传染性的重要依据之一[12]。酶联免疫吸附法是目前实验室常用的检验方法，相关检测试剂易于保存，结果判断较为客观，常用方法有直接法、间接法、双抗体夹心法等，能够进行乙肝两对半定性测定，在乙肝诊断、病情监测、疗效评估中均具有较高的价值[13]。但该方法无法进行定量检测，不能获取各血清标志物具体浓度，在检验中的一系列手工操作步骤较为繁琐，容易受人为因素、环境因素等的影响。直接化学发光法历经多年发展已成为医学领域常用的新兴免疫检测技术，具有灵敏度高、特异性强、试剂稳定性高、自动化程度高等优势，理论上最高灵敏度可达到10-18Mol/L。单个样本测量光信号时间仅数秒，大大缩短了加样到得出分析结果的时间。常用的检测方法有直接化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析、酶促化学发光免疫分析等，能够满足不同检测需求。相关研究[14]也证实，与酶联免疫吸附法相比，直接化学发光法在乙肝诊断中的准确性更高。

综上所述，在乙型病毒性肝炎诊断中，直接化学发光法的诊断准确性与灵敏度均高于酶联免疫吸附法，临床应用价值更高。

参考文献

[1]李芮,姚云清.彩色多普勒超声与瞬时弹性成像诊断乙肝后肝硬化的价值研究[J].现代仪器与医疗,2023,30（01）:64-68.

[2]左林,屈晓艳,肖刚,等.256层CT动态增强扫描联合血清甲胎蛋白异质体比率、高尔基体蛋白73对乙肝相关性肝细胞癌的诊断价值[J].延安大学学报（医学科学版）,2022,20（01）:68-71+76.

[3]赵佳,白云,姜小建,等.肝特异性对比剂MR扫描联合异常糖链糖蛋白、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体L3检测在乙肝相关性肝细胞癌诊断中的应用价值[J].临床医学研究与实践,2023,9（03）:105-108+129.

[4]Yandan W,Xiaotao L,Yuan M,et al.Routine evaluation of HBV-specific T cell reactivity in chronic hepatitis B using a broad-spectrum T-cell epitope peptide library and ELISpot assay[J].Journalof Translational Medicine,2023,22（1）.

[5]丁艺文,操焕坤,宗方,等.二维超声剪切波弹性成像和血清学指标评分诊断慢性乙肝患者肝纤维化的价值[J].浙江医学,2023,45（18）:1937-1942.

[6]韩鼎盛,黎雅琳,黄婷婷,等.钆塞酸二钠增强MRI对乙肝肝硬化背景下肝内肿块型胆管癌与不典型肝细胞癌的鉴别诊断价值[J].临床放射学杂志,2023,42（06）:947-952.

[7]盛秀红,许英.血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA指标检测在乙肝患者肝损害程度诊断中的临床意义[J].吉林医学,2023,44（05）:1170-1172.

[8]袁榕晨,程方明,向宽辉,等.化学发光法丁型肝炎病毒IgG抗体检测试剂性能评价[J].中华检验医学杂志,2023,47（03）:234-238.

[9]刘新,金子铮,刘宁,等.乙肝核心相关抗原联合AFP、PIVKA-Ⅱ对乙肝相关肝癌的诊断价值研究[J].北京医学,2023,45（10）:852-857.

[10]王钰琛,王勤英.尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶尿视黄醇结合蛋白尿β2微球蛋白联合检测对乙肝肝硬化患者早期肾损伤诊断的临床价值[J].中国药物与临床,2021,21（22）:3671-3674.

[11]杨学平,王雪梅,王玥,等.血小板计数与脾面积比值和血小板计数与脾长径比值诊断乙肝肝硬化患者食管静脉曲张的对比研究[J].临床超声医学杂志,2021,23（03）:229-231.

[12]刘芳,季良,陈男男,等.血清甲胎蛋白异质体L3、超敏C反应蛋白及乙肝病毒载量在诊断乙肝肝硬化与肝癌中的价值[J].黑龙江医学,2021,45（09）:984-986.

[13]李爱萍.乙型肝炎病毒DNA及乙型肝炎表面抗原的定量检测在诊断乙肝肝硬化中的临床应用[J].山西医药杂志,2021,50（13）:2030-2033.

[14]王晨聪,张云庆.化学发光法与酶免法在乙肝五项检测中的对比分折[J].航空航天医学杂志,2023,34（07）:785-788.