实时荧光PCR检验对高危HPV检测的应用价值分析

【摘要】目的：观察分析为接受检验的高危型HPV感染患者实施实时荧光PCR检验的临床价值。方法：选取2022年1月到2024年1月期间，部分在我院接受治疗的高危型HPV感染患者进行诊断，所有患者均接受HC-Ⅱ检验法、实时荧光PCR检验进行检验，将所有患者最终的检验结果进行分析，观察是否存在差异。结果：在HPV阳性检出率方面，实时荧光PCR检验更加优异，两种检测方式的检验符合率达到83.33%；检测不同等级的宫颈病变时，两种检测方式的检出率差异不显著（p＞0.05）。结果：在诊断慢性宫颈炎和鳞状上皮病变时，实时荧光PCR检验的阳性检出率更高，此类检验方式可以为患者的临床治疗提供更加有针对性的方案，可以推广应用。

【关键词】实时荧光PCR；高危型HPV感染；应用价值；第二代杂交捕获试验检测

人乳头瘤病毒（HPV）是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，是一种常见的性传播感染[1]。人乳头瘤病毒（HPV）是通过性交、口交、肛交等方式传染给他人的。HPV按病毒种类可划分为两类，分别是高危型和低危型。高危型HPV感染可导致宫颈癌、阴道癌、外阴癌、肛门癌、喉癌等多种恶性肿瘤的发病[2]。低危型HPV感染可导致良性病变，如生殖器疣、口腔疣等。HPV感染多数可在数月后自行消退，但仍有部分人感染后易进展为癌前病变，故HPV感染的早期检测与治疗对防治相关疾病具有重要意义。第二代杂交捕获实验（HC－Ⅱ）是临床上用于诊断高危HPV感染的常用诊断技术，这类诊断技术有较高的工作效率，并且成本较低，诊断效果比较良好，但是在对患者的病变类型进行鉴别时，整体效果无法达到理想要求。分子医学的不断发展使得PCR检验技术在临床广泛应用，克服了传统PCR技术的缺点，实时荧光PCR技术具有更高的特异性以及精确性，检测结果的差异性相对较小。基于此，本次研究中对高危型HPV感染患者实施不同的诊断方式进行检验，探讨在检高危型HPV感染患者的过程中，实施荧光定量PCR检验技术的临床诊断价值。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2022年1月到2024年1月期间部分在我院接受治疗的高危型HPV感染患者作为研究对象，一共选取80例，询问了解患者的各项基本信息并详细进行记录：研究组患者的年龄范围、平均年龄分别为31-68岁，（44.52±0.27）岁。我院伦理委员会对于本次实验流程表示同意。

1.2方法

HC-Ⅱ检验法：在取得试样之后，由试验者核对和确认数量信息的正确性。将待测样品置于专用试管中，采用HC-II杂交信号扩增系统，结合HPV-DNA试剂盒，进行相应的检测操作。利用RNA探针对试样进行杂交，并对其荧光强度进行测定，得到最后的检测结果。若最后的测试结果大于1pg/ml，即为阳性。

实时荧光PCR检验：使用扩阴器将患者的宫颈口完全暴露，使用棉拭子将患者阴道部位的分泌物擦拭干净，将宫颈刷放至宫颈口，向逆时针方向缓慢转动4圈，然后取出宫颈刷放入到洗脱管中，管盖旋紧，将宫颈刷折断，仅仅将刷头留置在洗脱管中。将收集的宫颈脱落细胞标本放入1.5ml微量离心管内，使用离心机离心处理之后，倒出上层清液，将50μg裂解液加入其中，悬浮沉淀，加热10min之后，继续使用离心机离心处理，将上清液保留待用。PCR扩张，分别在50℃和90℃加热15min、10min，40个55℃～95℃循环，使模板DNA加热到95℃，双链DNA解离为单链。将PCR产物加入杂交缓冲液，水浴加热变性10min，51℃环境下进行杂交，杂交时间为1h，洗脱15min。POD孵育洗涤，显色。循环阈值（cyclethreshold，Ct值）＜37则表示检验结果为阳性，反之为阴性。

1.3观察指标

比较HC-Ⅱ检验法、实时荧光PCR检验法阳性符合率以及阳性检出率差异；统计实时荧光PCR检验法对于不同病变类型的检出情况。

1.4统计学分析

在分析数据的过程中，用SPSS20.0软件，用t或者X2对资料进行检验，组间比较，P＜0.05可得差异显著。

2结果

2.1两种检验方式的阳性符合率以及阳性检出率

实时荧光PCR检验的HPV阳性检出率更高，两种检测方式的检验符合率达到83.33%（p＜0.05）。具体如下表1所示：

表1：两种检验方式的符合率以及阳性检出率

2.2不同病变类型检出情况

两种检测方式检测不同等级的宫颈病变时，检出率差异不显著（p＞0.05），但是在诊断慢性宫颈炎和鳞状上皮病变时，实时荧光PCR检验的阳性检出率更高（p＜0.05）。具体如下表2所示：

表2：两种检验方式检测不同病变类型

3讨论

感染人乳头瘤病毒的患者在临床上非常常见，据研究数据显示，70%左右的女性均有过感染人乳头瘤病毒的情况，对宫颈癌患者的人乳头瘤病毒感染情况进行检测，检测结果基本呈阳性，因此对于患有宫颈类疾病的女性患者而言，人乳头瘤病毒的感染情况与患者宫颈疾病的发展情况有密切的关系，而女性患者患有高危型HPV感染是机体患有宫颈癌以及癌前病变的必要条件之一。在宫颈癌病变发生的诱发因素当中，高危HPV是诱发宫颈癌病变的重要因素[3]。一旦诱发宫颈癌病变，将会对患者的机体健康以及生命安全造成严重危害。由于HPV病毒可对人体免疫系统造成侵袭，提高机体炎症细胞因子数量，促使引发炎症反应，从而导致形成恶性肿瘤。因此需要对患者感染高危型HPV病毒的情况进行有效诊断，及时对其采取有效治疗干预，延缓患者的疾病进展，才可以使得防治疾病的效果达到理想状态，促进提高患者的生存质量[4]。在HPV感染检测中，可应用的检测方法种类较多，包括第二代杂交捕获试验法、实时荧光PCR法等多种检测方法。为了有效提高HPV感染诊断效率，需要探讨具有较高检测价值作用的检测方法。

HPV病毒的确诊方法包括病毒分离培养、组织病理学检查等，也可以进行一些实验室检测，如免疫学检查等[5]。第二代杂交捕获试验法是放大抗体捕获信号，并且监测化学发光信号，以此确定被测样品是否被感染。采用实时荧光PCR技术，在PCR反应系统中引入荧光基团，利用荧光信号对PCR全过程进行监控，并对其进行量化分析，从而确定待测样品的浸染程度[6]。尽管二代杂交捕获测试技术具有较高的检测精度，但其操作过程繁琐、耗时长，限制了其在临床上的广泛应用[7]。因为实时荧光PCR检验法，在进行检测的时候，可以利用全自动分析仪来进行相应的操作，这样可以提高工作效率，减少错误率，从而得到更加精确的检测结果[8]。由于实时荧光PCR的优点被发现，这种检测方法在生物学和医学等领域得到了广泛地应用。实时荧光PCR检测法的工作原理是在PCR反应系统中加入荧光试剂，使其与PCR扩增产物相结合，通过对荧光反应状态的观测来分析特定的DNA，这样既能避免样品的污染，又能提高检测的效率、灵敏度和特异性，同时还能在检测过程中实现自动定量，而且它的适用性更广，因此在病原菌的检测中得到了广泛地应用[9]。在实时荧光PCR法的临床实践中，即使不针对样品的PCR产物进行特殊处理，也可以进行相关的检测，从而将扩增物污染的风险降到最低，从而全面保障检测结果的准确性。实时荧光PCR法具有良好的自动操作性能，能有效地避免环境因素对样品的污染，避免了假阳性，提高了检测的准确度。本文通过比较HC-Ⅱ检验和实时荧光PCR检验在检验高危型HPV感染患者的临床价值，寻找诊断高危型HPV感染的最佳临床诊断方式，结果显示实时荧光PCR检验HPV阳性检出率更高，实时荧光PCR检验在诊断慢性宫颈炎和鳞状上皮病变时的阳性检出率依旧比HC-Ⅱ检验更加优异，并且实时荧光PCR检验可准确判断患者感染状况，弥补HC－Ⅱ检测在病变类型鉴别中的不足，为临床提供更多疾病信息。

综上所述，在高危型HPV感染患者的临床诊断过程中，实时荧光PCR检验的优势要明显大于HC-Ⅱ检验，可广泛运用。 

【参考文献】

[1]许秋芳,张国平,闫美娜.用荧光PCR法和生物芯片法检测人乳头瘤病毒核酸的结果比较[J].抗感染药学,2020,17(12):1798-1800.

[2]陆妹英.三种HPV-DNA检测法在筛查高危型HPV感染中的应用效果[J].当代医药论丛,2021,19(12):129-130.

[3]王晓明，戴卫健，余道军，等.多重实时荧光定量PCR方法在高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测中的应用[J].临床检验杂志,2020,38(11):841-844.

[4]袁洋.PCR检测高危HPV基因分型对宫颈癌及癌前病变的诊断价值分析[J].中国医学工程,2022,30(3):92-94.

[5]樊晓阳.实时荧光定量PCR在高危型HPV感染检测中的应用价值[J].河南医学研究,2020,29(20):3808-3810.

[6]麦艳媚.实时荧光PCR与基因芯片法检测人乳头瘤病毒的方法学比较[J].吉林医学,2021,42(12):2882-2884.

[7]赵再英.观察实时荧光PCR法在高危型人乳头瘤病毒检测中的应用[J].中国社区医师,2020,36(11):134-134,136.

[8]王波.实时荧光PCR检验对高危HPV检测的应用价值分析[J].现代医学与健康研究(电子版),2020,4(20):100-101.

[9]王瑞,陈咪咪.实时荧光PCR法在高危型HPV检测中的应用价值[J].临床医学研究与实践,2022,7(28):123-126.