LAISS法对不动精子的筛选在卵胞浆内单精子显微注射的临床应用

摘要 目的 探究低脉冲激光筛选法（laser-assisted immotile sperm selection,LAISS)与精子尾部柔韧性测试(sperm tail flexibility test,STFT)在辅助生殖技术应用的效果区别。方法 选取2023年1月－2024年6月在我院男科门诊接收的男性非梗阻性无精子症患者、逆行射精症患者为研究对象，非梗阻性无精子症组和逆行射精症组分别以LAISS法和STFT法收集存活精子行卵胞浆内单精子注射法（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）受精后，收集受精率、优胚率、囊胚形成率等数据。结果 针对未获得活动精子病例采用LAISS和STFT分别收集精子，两组分配相同卵子数进行ICSI受精。采用LAISS法筛选精子后形成的胚胎受精率要高于采用STFT筛选精子，差异有统计学意义。结论 通过低脉冲激光击打精子尾部的方法可以结合ICSI技术，可以应用于非梗阻性无精子症和逆行射精症的患者，可减轻患者痛苦，帮助患者获得自己的后代。

关键词:LAISS；非梗阻性无精子症；逆行射精症；ICSI。

在20世纪90年代，ICSI技术的出现，无疑是男性不育治疗领域的一大飞跃[1]。但在处理完全不活动的精子时，区分其是否存活对受精成功显得尤为重要，因为死精子无法激活卵子进行正常的受精过程[2]。本次研究的焦点在于探讨LAISS在非梗阻性无精子症和逆行射精症的在辅助生殖技术中应用价值。通过对非梗阻性无精子症患者睾丸穿刺获取的精子以及逆行射精症中获得的不动精子进行筛选，后行ICSI受精，并观察胚胎的生长发育情况及相关参数，对两种方法的检测效果进行分析。

1资料与方法

1.1 研究对象 选取我院男科接收的男性非梗阻性无精子症患者20例、逆行射精症患者14例，其中在取卵日未获得活动精子18例，18例患者配偶取卵后共获得108枚平均分成两组，每组卵数为54枚，分别采用LAISS法和STFT法受精，其中采用LAISS进行ICSI受精为A组，采用尾部柔韧性测试选择精子进行ICSI受精为B组。剩余16例取到活动精子的患者编入C组，受精卵数为87枚，进行对照。观察各组受精率等指标。

1.2 研究方法

1.2.1LAISS、STFT的试剂配制与操作方法均依照第5版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》

1.2.2 ICSI操作皿的制备 传统ICSI操作皿由Vitrolife公司提供。激光筛选活精子ICSI操作皿由MOPS液微滴，不加PVP微滴，直接将精子悬液制成微滴。两种皿都提前2h置于37℃不通气培养箱中进行温度平衡。

1.3 统计学分析 用SPSS26.0软件进行分析。

2结果

2.1LAISS法与STFT法受精后的关键参数情况比较 A组患者的受精率高于B组患者，差异具有统计学意义；A组2PN率、优胚率、囊胚形成率与B组之间差异没有统计学意义。A组患者的胚胎在囊胚形成率高于与C组结果有差异有统计学意义( P＜0.05) ，见表1。

表2 A组与B组的受精率、2PN率、优胚率和囊胚形成率的比较（x̄±s）

#表示差异具有统计学意义，P＜0.05。

3讨论：

针对男性不育常采用第二代试管技术-ICSI，技术关键在于将存活的精子通过注射针注入成熟的卵母细胞，激活卵母细胞恢复减数分裂，以及完成受精过程。在ICSI操作中，精子的选择主要依赖于其活动性能。然而，非梗阻性无精子症和逆行射精症患者的精子往往活力极低甚至完全静止不动。使用这类患者的精子进行ICSI受精时会导致受精率降低，胚胎发育的情况不理想，最终导致临床不妊娠的不良结局。问题的根源在于，这些从睾丸或者尿液中获取的静止不动的精子可能已死亡，当死亡的精子被机械性注入卵母细胞内时，卵子的受精机制无法启动，从而导致受精障碍[2]。因此，为了快速且有效地筛选出存活的不动精子进行ICSI操作，显得尤为重要。

Xu ZP等人使用了两种方法来检测精子DNA损伤，但当应用激光筛选精子时，并未发现精子DNA受到任何直接损伤[3]；研究表明[4]，激光辅助筛选精子不会导致任何可观察到的外膜损伤。因此，LAISS对精子的损伤可能比STFT更小，从而更有利于卵母细胞的受精以及后续胚胎的发育，这可能是LAISS的优质胚胎率和优质囊胚形成率较STFT更高的一个原因[5]。但本研究的结果不同，可能为样本量不够的原因。激光辅助孵化对胚胎的发育并无明显影响，而筛选活精子所用的激光能量远远低于辅助孵化所用的激光能量。本研究中逆行射精症患者可以在尿液中获得存活精子，而不必选择睾丸穿刺取精，减少了患者的痛苦。因此，LAISS对非梗阻性无精子症和逆行射精症患者是一个较好的治疗方法。但针对精子鞭毛多发形态异常等尾部结构缺陷的疾病时，由于精子尾部本来就存在缺陷，激光无法鉴别其是否存活，LAISS可能存在一定的局限性。

综上所述,LAISS可明显改善从睾丸来源的不动精子或者尿液中不动精子行ICSI后的胚胎培养参数。后续可增加样本量进一步探讨激光筛选活精子对和提高精子的活力来提高筛选活精子的准确性，及对后代的远期影响。

参考文献：

[１]世界卫生组织．世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册［M］．第5版．北京：人民卫生出版社,2011:5-25.

[２]中国医师协会生殖医学专业委员会.卵胞质内单精子注射（ICSI）技术中国专家共识(2023年) [J].中华生殖与避孕杂志,2023, 43(7): 659-669.DOI: 10.3760/cma.j.cn101441-20230228-00076.

[３]Xu ZP, Sun HX, Hu YL, Zhang NY, Zhao X.[Laser-assisted immobilization causes no direct damage to sperm DNA]Zhonghua Nan Ke Xue.2007;13:216–8.

[４]Xue Y, Xiong Y, Cheng X, Li K. Applications of laser technology in the manipulation of human spermatozoa. Reprod Biol Endocrinol. 2023 Oct 21;21(1):93. doi: 10.1186/s12958-023-01148-9. PMID: 37865766; PMCID: PMC10589983.

[５]黄志辉,朱元,许定飞,等.胚胎行激光透明带辅助孵化13例临床妊娠报道[J].江西医药,2010,45(5):460-461.